第四讲组合化学与生物合成现代生物技术与新药研究教学课件.pptVIP

II 组合化学与组合生物合成 主要内容 一、组合化学简介 1 组合化学基本原理 2 固相组合化学合成 3 液相组合化学合成 二、定向生物合成 三、突变生物合成 四、抗生素基因工程简介 五、‘聚酮体途径’抗生素的生物合成 六、组合生物合成进展 组合化学的起源 组合化学最早起源于固相多肽合成。就本质而言，组合化学是建立在高效平行的合成之上的，这种合成方法步骤有限，但生成的化合物库内包含大量化合物。 组合化学不是单一的一种技术，它包含了一系列化学技术。它是一门交叉性学科，它以有机化学为基础，与生物化学、药物化学密不可分，并涉及到数学、物理和计算机等多门科学。而传统有机合成方法是对单个分子分步合成，在数量上是处于低层次的，合成速度太慢，无法满足对化合物量的需要。 组合化学 1 组合化学是用于新药合成和筛选的一种全新的方法，1988年Furda 等首先提出了此概念，而始于90年代初，它打破了逐一合成、逐一纯化、逐一筛选的模式，以合成和筛选化合物库的形式寻找和优化先导化合物，从而大大加快了发现药物先导化合物的速度。 2 组合化学结合了化学合成、电脑设计、计算机技术等，能同时产生许多种结构相关但有序变化的化合物，然后用高度灵敏的生物学方法对这些化合物同时进行筛选，从中确定具有生物活性的物质，再经结构测定，以期找到全新的先导化合物，具有其高效、微量、高度自动化的特点。 3 分为三个阶段：分子多样性化合物库的合成；群集筛选（进行活性检测）；活性分子的结构测定。化合物的合成包括化学合成和生物合成两种；化合物库的筛选可以是固相筛选，也可以是液相筛选或两者结合。 组合化学基本原理 分子多样性化合物库的建立 如何设计模板分子；选择怎样的构建单元；确定何种合成方案；如何完成自动合成等。 群集筛选 选定筛选模式为固相筛选或用何法（细胞功能筛选、受体筛选、抗体筛选等）进行筛选，用何种指示剂（同位素标记、荧光标记、染料染色)等。具体的筛选方法有三种：固相筛选、液相筛选和两者的结合 。 确认活性分子结构 编码技术已应用于解析组合库中高活性化合物的结构。最早提出此技术的是Brenner和Lerner，Nicolaou等提出了射频编码合成仪突破了以往的编码形式，它是建立在射频信号及应用多功能微反应仪的半导体记忆装置基础上的。 组合化学策略 要合成大量的化合物，目前有两种不同的策略可以进行： 混合物合成方式和平行合成方式 混合物合成方式 既是在反应体系中多种反应物混合在一起进行反应，得到多种产物如：正丁酸与醇缩合形成酯的反应。 平行合成方式 是指在合成过程中以平行的方式同时合成多种反应产物。 每个反应是独立进行的，如上述反应当每个反应同时独立进行时，即为平行合成方式。 组合合成技术 高通量筛选 High Throughput Screening 固相合成法 是最早以固相肽合成建立起来的组合方法。 固相合成Solid phase synthesis技术由Merrifield(1963)首创，他使用取代的树脂作为固相载体来合成多肽； 但是大量的以多肽合成方法衍生出来的固相合成策略的应用是在80年代才有了突破。 固相合成的优点 1）可以使用过量的试剂使反应趋于完全。 2）反应结束后，可以通过过滤、洗涤固相介质除去反应物。 3）节省了分离纯化的时间 4) 反应收率高，产物纯度高。 树脂珠的种类 目前固相合成中较多使用的树脂是小的球状树脂珠（80-200um）,常用的有以下几种 二、定向生物合成（Directed Biosynthesis) 生物合成工程 Biosynthetic engineering is the rational manipulation of the biosynthetic pathway for a microbial metabolite in order to generate novel products 定向生物合成 Directed Fermentation/Mutasynthesis. The changes in structure can be extended still further by feeding to the producing organism synthetic compounds, which are analogues of natural intermediates in the biosynthetic pathway (Directed Biosynthesis). This is particularly efficient if biosynthesis of the natural intermediate can be knocked out allowi