第3章病毒感染力的滴定.pptVIP

第三章 病毒感染力的滴定 半数致死量LD50（50% lethal dose） 半数鸡胚感染量EID50 (egg 50% infective dose) 半数细胞培养物感染量TCID50（tissue culture 50% infective dose) 蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU） 测定病毒感染力的方法: 一、病毒TCID50的测定 操作步骤 在青霉素瓶中将病毒作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。 将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度作8孔，每孔接种100μl。 在每孔加入细胞悬液100μl，使细胞量达到3×105个/ml。 设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。 逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。 结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法 TCID50的计算方法 Calculation of TCID50 Use of Reed Muench method (if 50 ul of virus dilution is added to each well) 病毒液 CPE孔数 无CPE 累 计 出现CPE孔 稀释度 孔数 CPE孔数 无CPE孔数 所占的% 10-1 8 0 27 0 100（27/27） 10 -2 8 0 19 0 100（19/19） 10 -3 7 1 11 1 91.6 （11/12） 10 -4 3 5 4 6 40（4/10） 10 -5 1 7 1 13 0.7（1/14） 10 -6 0 8 0 21 0（0/21）? Reed-Muench两氏法 距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数） ＝（91.6-50）/（91.6-40） ＝ 0.8 lgTCID50=距离此例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数 =0.8×(-1)+(-3) =-3.8 TCID50=10-3.8／0.1ml Karber法 病毒液稀释度 出现CPE孔的比率 10-1 8/8=1 10-2 8/8=1 10-3 7/8=0.875 10-4 3/8=0.375 10-5 1/8=0.125 10-6 0/8=0 lgTCID50=L-d(s-0.5) L: 最高稀释度的对数 D：稀释度对数之间的差 S：阳性孔比率总和 lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5) =-3.875 TCID50=10-3.875/0.1ml 二、病毒蚀斑技术 病毒蚀斑（plaque) 又称空斑，指病毒在已长成的单层细胞上形成的局限性病灶。 原理：适当稀释的病毒悬液接种经长成