现代遗传学14遗传工程学.pptVIP

什么是遗传工程？ 体外DNA重组技术：利用工具酶将外源片段和载体连接，导入生物体并使其稳定复制和传代的技术 目的 研究工作 生物产品(生物反应器) 改良物种(提高品质) 基因治疗 工具酶 A. 剪切酶类 有目的有选择的把目的片段切开 B. 连接酶类 将目的片段和载体相连 C. 其他工具酶 修饰, 加工等作用 同切酶和同粘酶 同切酶: 识别相同的位点, 但生成不同的末端. 同粘酶: 识别不同的位点, 但产生相同的粘性末端 连接酶及其对底物的要求: T4 Ligase, Ecoli Ligase 载体及其构成基本要素 能独立复制并稳定传代:复制起始点ori或自主复制序列ARS和着丝粒, 端粒 方便插入外源片段: 单酶切位点 选择标记: 药物抗性 报告基因: 插入筛选标记 易分离提取 高产率（多拷贝） 强启动子 多宿主 常用载体 质粒(plasmid)，粘粒(cosmid)，噬菌体，噬粒(phagemid), 病毒，PAC，YAC，BAC 常用宿主 大肠杆菌: 繁殖快, 易培养, 易分离产物 噬菌体: 转化效率高, 易于保存 酵母: 繁殖最快的真核生物, 适于有蛋白质加工的基因表达 如何提高克隆效率? 提高插入片段和载体的比例 尽可能采用粘端连接* 载体脱磷以降低载体自连 插入片段磷酸化 改进转化条件 问题: 有一外源片段用某种酶切,生成了5