第九章植物离体繁殖.ppt

（2）取材 一般在植物开始生长，芽已膨大但芽鳞片还未张开时最为合适，此时芽生长旺盛，并有芽鳞片的保护，不易污染。 （3）芽的位置 在一些草本植物（如菊花等）中，使用顶芽或上部的芽作为分生组织或茎尖培养时的成功率常比侧芽或基部的芽要高。 （4）多年生的木本植物 部分返幼阶段或年龄较低的根蘖苗或不定芽做材料； 采取某些措施如将芽接在实生苗上； 保持高水平的水肥进行营养繁殖； 用细胞分裂素喷洒植株的方法。 培养材料的增殖。主要增殖方式为诱导丛生芽或不定芽产生，再以芽繁殖芽的方式增殖，兰科植物为原球茎增殖途径。 4-8周继代一次。一个芽苗增殖数量一般为5-25个或更多，多次继代可大量繁殖。 增殖培养基：适当提高细胞分裂素和矿质浓度 增殖体的大小和切割方法 切割茎段 分离丛芽 分离胚状体 分离原球茎 分离愈伤组织 离体生根：也称试管内生根。降低无机盐浓度，减少或去除细胞分裂素，增加生长素浓度。 活体生根：也称试管外生根。通常芽苗可先在生长素中快速浸蘸或在含有相对高浓度生长素的培养基中培养5-10天，然后移到基质中生根。 生根培养时间一般为2-4周。 1、移栽用基质 2、移栽前的练苗 3、移栽和幼苗的管理 1、移栽用基质 基质特点：具备透气性、保湿性和一定的肥力，容易灭菌处理，并不利于杂菌滋生。 一般可选用珍珠岩、蛭石、砂子等。为了增加粘着力和一定的肥力可配合草炭土或腐殖土。配时需按比例搭配，一般用珍珠岩，蛭石，草炭土或腐殖土比例为1:1:0.5；也可用砂子：草炭土或腐殖土为1:1。 2、移栽前的练苗 移栽前先不开口移到自然光照下锻炼３～５d，让试管苗接受强光的照射，使其长得壮实起来。 再开口练苗2～3d，经受较低湿度的处理，以适应将来自然湿度的条件。 3、移栽和幼苗的管理 1）起苗： 从试管中取出发根的小苗，用自来水洗掉根部粘着的培养基，要全部除去，以防残留培养基滋生杂菌。但要轻轻除去，应避免造成伤根。 2）药剂处理：将发根的小苗先用0.1－0.3％硫酸铜溶液中浸泡几分钟（或用多菌灵） 3）栽植：用一个筷子粗的竹签在基质中插一小孔，然后将小苗插入，注意幼苗较嫩，防止弄伤，栽后把苗周围基质压实，栽前基质要浇透水，栽后轻浇薄水，用塑料薄膜覆盖，保证空气湿度达90%以上。 4）管理： (1)保持小苗的水分供需平衡 (2)防止菌类滋生 (3)一定的温、光条件 (4)保持基质适当的通气性 ? ? ? ? ??????????????? ??????????????? ??????????????? ??????????????? ??????????????? 外植体 培养基 培养条件 继代培养 移栽 外植体的来源：最适的为茎尖、带芽茎段，也可以利用叶片、子叶、根段、花器官组织等。 外植体生理年龄：幼嫩组织分化能力更强。 外植体大小：不能太小，否则影响成活率。除非是用于脱毒苗的生产。 基本培养基：MS培养基应用最为广泛。对于某些植物及生根阶段，以1/4或1/2MS较好。蔗糖和葡萄糖浓度为2-4%。生根时稍低。 植物生长调节剂：主要以细胞分裂素和生长素的配合使用，调节外植体的生长和分化。另外ABA、GA、CCC等也具有不同的作用。 培养基的物理特性：以固体培养较为普遍，也有采用液体培养，如兰花原球茎的增殖。 光照:1000～3000ＬＸ，生根3000－10000ＬＸ，每天光照14－16h，黑暗8－10h。 温度：25℃左右，有些需要低温处理。 湿度：瓶内湿度100％，环境湿度要求70％－80％。 气体：液体培养需要振荡增加空气，有的培养需要通气好，可用通气好封口膜。 芽的诱导及扩大繁殖（继代培养）易出现“驯化”现象，所以，要注意调整培养基激素浓度（开始时需要较高浓度生长调节物质，随继代时间的延长，减少或不加入就可使其生长）。继代间隔时间一般为20天左右。 　　　　 根系结构不完善的试管苗移栽后不易存活。要求根系结构完整，具根毛，再生根的吸收能力强。 叶表皮组织不发达的试管苗也不易移栽存活。移栽要求打开瓶口驯化2-3天；或在瓶内添加一些生长延缓剂如PP333、CCC等培育壮苗。 2、叶片结构方面： 叶表角质层或蜡质层不发达或无； 叶无表皮毛或极少； 叶解剖结构稀疏； 气孔开口大，不关闭； 叶片存在排水孔； 光合作用能力极低。 1、根系方面：生根难、有的从愈伤组织产生的根与芽输导系统不相通、根无根毛、根无吸收功能或低等，都影响成活。 试管苗特点： 初始外植体 无菌培养物 稳定繁殖体 丛生芽嫩梢 愈伤组织 有效嫩茎 生根苗 温室 大田苗 定植 外植体灭菌 继代繁殖 初代培养 无根苗 移栽 生根 植物快繁的重要用途是进行植物的商业化生产。世