紫外测定蛋白含量.ppt

实验一 紫外吸收法测定蛋白质含量 一、实验目的 学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理； 熟练掌握紫外分光光度计测定原理及使用方法。 二、实验原理 由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的吸光度A280与其浓度呈正比关系，可作定量测定。 优点：简便、迅速、不消耗样品等。 缺点：有误差和干扰。与标准蛋白中酪氨 酸、色氨酸含量相差较大的蛋白质 会有误差；样品中含有嘌呤、嘧啶等 吸收紫外线的物质，会产生干扰。 三、 实验材料、主要仪器和试剂 1．试验材料：待测的蛋白质溶液。 2．? 主要仪器： （1）紫外分光光度计，（2）试管与试管架，（3）刻度吸量管 3．试剂： （1）标准牛血清白蛋白溶液：准确称取经凯氏定氮法校正的结晶牛血清蛋白，配制成浓度为1mg/mL的溶液。 （2）待测蛋白质溶液 四、操作步骤 测定样品：直接将待测蛋白液倒入比色皿，280nm测吸光度 计算：绘制标准曲线，利用未知样品的吸光度求其蛋白质含量。 每管读数读两次取平均值