2叶绿体分离、离体叶绿体还原活性.docVIP

PAGE / NUMPAGES 实验五 叶绿体的分离、离体叶绿体的还原活性 一、实验目的 制备具有活性的离体叶绿体和测定希尔反应活力是研究叶绿体结构功能和光合作用机理的重要技术条件。 本实验通过学习分离制备叶绿体的技术方法，加深对希尔反应的理解及对光反应的认识。 二、实验原理 光合作用机制是一个比较复杂的问题，可分为光反应和暗反应，大致分为三大步骤： 1）原初反应光能的吸收、传递和转换过程）； 2）电子传递和光合磷酸化电能转变为活跃的化学能）； 3）碳同化活跃的化学能转变为稳定的化学能）。 光反应中，由水至NADP+的电子传递是由两个反应中心PSⅡ和PSⅠ经过两种连续光化学反应驱动的，PSⅡ的一个重要功能是利用光能使水裂解放氧。 2H2O 光子 O2+ 4H++ 4e- 英国生物化学家Hill1937）首先将离体叶绿体加入有适当氢受体如草酸高铁钾盐，2,6-二氯酚靛酚，NAD+和NADP+）的水溶液中，照光后即有O2放出，这就是水的光解，即希尔反应。 叶绿体的分离采用离心分级分离，即利用叶绿体的直径和沉降系数与其他细胞器不同的特点，先用低速离心除去细胞碎片，后用高速离心沉降叶绿体。希尔反应活力的测定是将叶绿体加入氢受体，并照光，水被光解放氧，溶液颜色发生变化，通过比色测定。 三、实验材料 新鲜菠菜叶片。 四、设备与试剂 分光光度计，离心机，照光装置2 只500W 钨灯