第4章工业发酵灭菌1.pptVIP

2、蒸汽间接加热连续灭菌系统 蒸汽不直接与培养基接触，而是通过热交换器对培养基进行加热。 热交换器有板式和螺旋板式两种 螺旋板式交换器的特点：流道宽，流速快，可减少热交换器表面结垢现象。适用于含有固行悬浮物的培养基的灭菌。 板式交换器的特点：适用于含有少量固行悬浮物的培养基的灭菌。 温度随时间的变化 连续灭菌与分批灭菌的比较与选择 分批灭菌 优点： 1.不需附加设备 2.蒸汽利用率高 3.节约劳动力 ?缺点 1.培养基质量差 2.罐的利用率低 3.冷却水用量大 连续灭菌 优点： 1.采用高温快速灭菌法 2.可以把培养基按其性质分开灭菌 3.有利于自动控制 4.节省冷却水 缺点 1.投资费用高 2.对物料要求高 3.蒸汽用量大 三、发酵设备灭菌 实罐灭菌时，发酵罐与培养基一起灭菌 连续灭菌时，发酵罐、种子罐等要先进行空罐灭菌。0.147-0.180MPa，维持45-60min。 空消后不能立即冷却，先保压，待培养基进入后，再开冷却系统。 附属设备：空气过滤器、补料系统和消泡剂系统等。 各个管路在灭菌前，要严格检查，以防泄露和“死角”的存在。 工业发酵灭菌 知识目标 理解工业发酵常用灭菌方法的原理和适用范围 掌握工业发酵培养基和发酵设备灭菌工艺的选择 掌握无菌空气制备的基本知识和典型工艺要求 一、热灭菌法 1、火焰灭菌法 直接在火焰上灼烧灭菌，如接种针和一些金属小工具、试管口、三角瓶口等灭菌采用这种方法，该方法简单有效，但局限性很大。 2、干热灭菌法 进行干热灭菌时，微生物细胞发生氧化，微生物体内蛋白质变性和电解质浓缩引起中毒等作用，其中氧化作用导致微生物死亡是主要依据。由于微生物对干热的耐受力比对湿热强得多，故干热灭菌所需的温度要高，时间要长，一般160～170℃，1～1.5h。 实际应用时，对一些要求保持干燥的实验器具和材料可以采用干热灭菌法。 湿热灭菌法 利用饱和蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌法。 其原理是借助于蒸汽释放的热能使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。 由于蒸汽有很强的穿透能力，湿热蒸汽存在潜热。 蒸汽来源方便，价格低廉，灭菌效果可靠，是目前最为常用的灭菌方法。一般的湿热灭菌条件为121 ℃，30 min。 湿热灭菌法 煮沸灭菌法 将要消毒的物品放入水中煮沸（100℃）15～20min，一般微生物的营养细胞都可以杀死，但不能杀死芽孢。 巴氏消毒法 法国微生物学家、化学家巴斯德首创的低温消毒法。加热到62℃，经过30分钟，以杀死不耐高温的物质中的微生物和病原体的消毒法。 牛奶、啤酒、黄酒、酱油和醋等用此法消毒。 湿热灭菌法 间歇灭菌法　 反复几次的常压蒸汽灭菌，以达到杀死微生物营养体和芽孢的目的。 操作步骤：100℃，30-60min；37℃，1d；同上重复三次…　 适用于不宜高压灭菌的物质，如糖类明胶牛奶培养基。 方法简单，但却麻烦；工作周期长。 湿热灭菌法 高压蒸汽灭菌法 使用密闭的高压蒸汽灭菌锅，使灭菌锅内蒸汽不外溢，增加压力，由于压力的增高，温度也随之增高，从而提高杀菌力，缩短灭菌时间。 最有效而广泛应用的灭菌方法 实验室常用的是0.1MPa，121℃，15～30min 应用范围 培养基，水，发酵罐等其他不适合干热灭菌的物品。 高压蒸汽灭菌法的注意事项： 完全排除锅内冷空气 灭菌完毕后要缓慢减压 压力降为零后打开盖子 二、辐射灭菌法 利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀死微生物 以紫外线最常用。紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗力强。紫外线的穿透力低，仅适用于表面灭菌和无菌室、培养间等空间的灭菌，且距照射物不超过1.2 m；对固体物料灭菌不彻底，也不能用于液体物料的灭菌。 三、化学药品灭菌法 某些化学药品与微生物发生反应（蛋白变性、酶失活、细胞通透性）而具有杀菌的作用。 化学药剂适于生产车间环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭菌等，不适用于培养基。 化学药品的灭菌使用方法，根据灭菌对象的不同有浸泡、添加、擦拭、喷洒、气态熏蒸等。 ⑴ 高锰酸钾 高锰酸钾溶液的灭菌作用是使蛋白质、氨基酸氧化，使微生物死亡，一般用0.1％～0.25％的溶液。 ⑵ 漂白粉 漂白粉的化学名称是次氯酸盐(次氯酸钠，NaOCl)，它是强氧化剂，也是廉价易得的灭菌剂。它的杀菌作用是次氯