抗-HBs效价测定RIA法.doc

抗-HBs效价测定RIA法 1　试剂 1.1　用（人）HBsAg（亚型ad,ay）包被的聚乙烯珠子。 1.2　125I标记的（人）HBsAg（亚型ad,ay）试液。 1.30.01mol/L　Tris缓冲液，内含4%牛血清白蛋白，pH7.4。 1.4　抗-HBs参比标准品，含抗-HBs10～160mIU　/ml。采用四点法　或五点法。 2　测定 先将检品按估计效价稀释成不同倍数，使其cpm计数落在参比标准品直线范围内。一般10%肌注丙种球蛋白可进行10、20、40倍稀释。乙型肝炎免疫球蛋白可进行500、1000、2000倍稀释。正式试验时根据预试结果调整稀释倍数。预试验用3个稀释倍数，正式试验用2个稀释倍数。 2.1　各取0.2ml参比标准品及不同稀释倍数的检品，加入反应盘的不同孔中。预试验时每个稀释倍数检品加1孔，正式试验每个稀释倍数检品加3孔。于每孔中小心加入一个HBsAg包被珠子，盖上密封胶纸，振荡或轻拍反应盘，排出气泡，并使珠子全部浸入液体中，置室温（15～30℃）结合18小时（16～20小时）。 2.2　去除胶纸，吸出孔内液体，每珠用4～5ml蒸馏水洗3次，最后一次尽量将水吸干。 2.3　于每孔中加0.2ml125I标记HBsAg试液，轻拍反应盘，排出气泡，并使珠子全部浸入液体中，盖上新的密封胶纸，置室温结合4小时（或45℃水浴2小时），去除胶纸，按2.2项冲洗。 2.4　用纸试管架将珠子从反应盘转移至塑料管中，其编号应与反应盘孔号一致。将反应管置适宜的井型γ计数器中计数cpm，洗后24小时内均可使用。 3　计算 3.1　先救求出参比标准品和各稀释倍数检品的平均cpm计数，以参比标准品抗-HBsmIu　/ml为横座标，以cpm计数为纵座标在座标纸上作图，连接各点成一直线。 3.2　从标准直线上查出各稀释倍数检品的cpm计数点，并从此点向下作一垂直线，在横座标上查出抗-HBs　mIU，再乘以检品稀释倍数，除以1000，求出2点或3点的平均值即为该检品的抗-HBs　IU/ml。 4　注意事项 4.1　预试验时应按试剂盒要求做阳性和阴性对照。 4.2　冰箱保存的试剂，用前应先于室温内放置1小时。 4.3使用不能自动减本底的γ计数器时，应减本底后再计算。 4.4　所有测定操作应遵守同位素实验室安全防护制度。