细胞生物学第二节课.pptVIP

第四讲 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 （一）动物细胞培养 从机体取出立即培养的细胞叫原代细胞（10代）。 将原代细胞分离、稀释接种到新的培养中继续培养的细胞为传代细胞。 从原代培养细胞中分离出来的可继续传代繁殖到40—50的细胞群体叫细胞株，细胞具有接触抑制的行为，有些具有贴壁生长的行为，具有正常的遗传物质。 从原代细胞或细胞株中获得的可无限传代的细胞叫细胞系。细胞无接触抑制行为，且具有遗传突变，带有癌细胞的特征。 （三）植物细胞培养 1、单倍体细胞培养：花药离体培养。（秋水仙素） 2、原生质体培养：去壁的植物细胞叫原生质体。可培养成植株或体细胞杂交植株。 （一）细胞融合与细胞杂交技术 真核生物的体细胞经过培养，两个或多个细胞融 合成一个双核或多核细胞的过程叫细胞融合。 动物细胞融合一般要用灭活的病毒(如仙台病毒)或 化学物质(如聚乙二醇，即PEG）介导；植物细胞事例时，要用纤维素酶去掉纤维素壁。 20世纪80年代又发明了电融合技术。 细胞融合可以在基因型相同的细胞间进行，也可以在基因型不同的种内细胞间甚至种间细胞间进行。 （二）细胞折合与显微操作技术 细胞拆合就是用物理方法（机械法和短波光）、化学法（用细胞松弛素）把细胞核与质分离开后将不同来源的细胞质与细胞核相互配合，形成核质杂交细胞。 显微操作技术：即在显微镜下用显微操作装置对细胞进行解剖和微量注射的技术。 第四讲 细胞膜与细胞表面 第一节 细胞膜与细胞表面特化结构 细胞膜又称质膜，是围绕在细胞最外层，由膜脂和膜蛋白构成。 一、细胞膜的结构模型——流动镶嵌模型 1925年Gorter（欧文顿）等人提出质膜由双层脂分子构成。 1935年Danielli和Davson提出三夹板模型。 1959年Robertson（罗伯特森）提出单位膜模型。 1972年Singer（桑格）和 Nicolson（尼克森）提出流动镶嵌模型。该模型主要强调①膜的流动性；②膜蛋白的分布不对称性；这是生物膜的基本特征。 根据已有的实验结果，生物膜具有如下共同特征： ①镶嵌性。膜的基本结构由脂双层分子层镶嵌蛋白构成，双层脂分子以疏水性尾部相对，极性头部朝向水 相。②流动性。蛋白质和类脂分子具有相对侧向流动性，③不对称性。膜两侧的分子性质和结构不同。④蛋白质极性。多肽链的极性区突向膜表面，非极性部位埋在脂双层内。 二、细胞膜（质膜）的成分 （一）膜脂：主要包括磷脂、糖脂、胆固醇三种类型。 1、磷脂：甘油磷脂和鞘磷脂（C、H、O、N、P） 磷脂构成了膜脂的基本成分，由极性头部和两条疏水尾部组成，为双极性分子（由极性头部和两条疏水尾部组成，为双极性分子）。 2、糖脂： 为鞘氨醇的衍生物。含1—7个糖残基。 3、胆固醇和中性脂质： 胆固醇主要存在于动物细胞，可调节膜的流动性、增加膜的稳定性及降低水溶性物质的通透性。某些细菌含有中性脂类。 4、膜脂的运动方式 膜脂分子的热运动方式：1、侧向运动；2、自旋运动；3、尾部摆动；4、翻转运动。 （二）膜蛋白 1、类型：膜周边蛋白和膜内在蛋白两类：。 外在膜蛋白为水溶性蛋白，分布在膜表面，与膜结合较疏松，用温和的方法就可从膜上分离下来，膜结构并不被破坏。内在蛋白多为跨膜蛋白，也有些插入脂双层中，与脂双层分子结合紧密。只有用去垢剂使膜崩解后才可分离出。 2、膜内在蛋白与膜脂结合的方式：主要方式有3种 内在膜蛋白跨膜结构域是与膜脂结合的主要部位。具体作用方式为： ①跨膜结构域含有20个左右的疏水氨基酸残基形成α—螺旋，其外部疏水侧链通过范德华力与脂双层分相互作用。 ②某些α—螺旋的外侧是非极性链，内侧极性链，形成特异极性分子的跨膜通道。 ③某些跨膜蛋白的跨膜结构域常常仅有10—12个氨基酸残基形成 β— 折叠结构。 3、膜蛋白的分离：去垢剂 是分离与研究膜蛋白的常用试剂，可使细胞膜分解。 去垢剂有离子型去垢剂(如SDS)和非离子去垢剂(Triton x—100)。 三、膜的的结构特点： （一）流动性 1、膜脂的流动：膜脂的流动性主要指脂分子的侧向运动。 膜蛋白的运动: （二）膜的不对称性 2、膜脂的不对称性 是指膜脂分子在膜的脂双层中呈不均匀分布，尤其糖脂的分布表现出完全不对称性（在质膜的外表面）。 3、膜蛋白的不对称性