第5章分子生物学研究方法上.pptVIP

化学合成法 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列 。 基因组DNA文库(genomic DNA library) cDNA文库(cDNA library) 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR) * * 5.6.2 蛋白质印迹法 分子生物学中最常用的蛋白质技术可能是蛋白质印迹法 （Western bloting），又称免疫印迹法（immunobloting） 原理：经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 5.6 蛋白质组与蛋白质组学研究技术 * * 蛋白质印迹法 用于二级抗体的检测有 以下三种： 放射性标记的抗体 与酶偶联的抗体 与生物素相偶联的抗体 5.6 蛋白质组与蛋白质组学研究技术 蛋白质组学中最有意义的突破是用生物质谱鉴定电泳后分离的蛋白质。 该技术是一种超灵明的技术，从理论上说，仅需少量样品就可获得错误率低于百万分之一的结果。 5.6 蛋白质组与蛋白质组学研究技术 5.6.3 蛋白