临床检验仪器原理及设计课程论文_血细胞分析仪的原理、现状及发展趋势.docxVIP

PAGE 1 血细胞分析仪的原理、现状及发展趋势[学习摘抄] 摘要：血液分析是临床诊断工作中常用的实验方法之一。它能为全身各系统疾病的诊断提供可靠的依据。本文重点介绍了目前临床应用的血细胞五分类分析技术的工作原理和技术特征，并在此基础上对于目前各种血细胞分析仪的应用现状和技术特点进行了综合的分析和比较，最后对血细胞分析仪的发展趋势进行了总结展望。 关键词：血细胞分析仪 血细胞五分类分析技术 前言 自50年代初库尔特先生发明了粒子计数技术的专利,制造了第一台血细胞分析仪并应用于临床以来,血细胞分析仪的发展已有50年的历史.血细胞分析仪实质上是指对一定体积内血细胞数量及异质性进行分析的仪器.最初的血细胞计数仪(Cell Counter)仅能计数红细胞(RED)和白细胞(WBC),后来又有了血红蛋白(HBG),血小板(PLT),红细胞压积(HCT),平均红细胞体积(MCV)等几个参数.而发展成为血细胞分析仪(Hematology Analyzer)后,又增加了许多分析和计算参数,如红细胞体积分布宽度(RDW),平均血小板体积(MPV),血小板体积分布宽度(PDW),血小板压积(PCT),大血小板比率,白细胞三分群,白细胞五分类,血红蛋白浓度分布宽度,异常淋巴细胞提示,幼稚细胞提示等各种参数和功能也不断地添加到一些品牌的仪器上。 本文重点介绍了目前临床应用的血细胞五分类分析技术的工作原理和技术特征，并在此基础上对于目前各种血细胞分析仪的应用现状和技术特点进行了综合的分析和比较，最后对血细胞分析仪的发展趋势进行了总结展望。 血细胞五分类分析技术原理 20 世纪50 年代以前，血细胞分析主要使用手工显微镜的方法进行。将稀释过的血液手工推片、染色后，利用显微镜目测，对白细胞、红细胞进行计数分类；通过将血红蛋白与试剂结合形成衍生物比色定量测量红细胞中血红蛋白的含量。对于小批量样本，手工镜检直接提取了血细胞最原始的信息，通过观测其形态，可将血细胞准确归类，为临床诊断提供最可靠的依据；对于大批量样本，由于受工作人员技术熟练度、连续工作时间、显微镜精度等诸多因素的影响，手工镜检费时费力，实验结果的精确性、准确性也受影响（其变异系数值高达8％～15%[11]），难以提供快速、准确、及时的报告。因此，血细胞的自动分析技术逐渐发展起来。 目前临床用于血细胞分析的技术主要有以下五大类：电阻抗法、流式细胞术、激光散射法／多角度偏振光散射技术／荧光法、各种细胞化学特性应用技术、电导射频法[2]。 1.1电阻抗法 20 世纪50 年代初，美国的库尔特先生（W. H. coulter）发明电阻抗法（Electrical Impedance）来进行血细胞计数和体积测定，这种方法也被称为库尔特原理（Coulter Principle）。电阻抗法是利用血细胞的非传导性质进行计数与分类，如图1所示。把用等渗电解质溶液稀释过的血细胞悬液倒入不导电的容器中（全血标本稀释倍数），将小孔管插到细胞悬液中，其内侧充满了稀释液。在小孔管内外各置一个电极，当小孔间充满导电的稀释液时，整个电路的阻抗为一定值；当血细胞通过微孔时，由于自身的非传导性，小孔间阻抗发生变化。保持电路中电流恒定，根据欧姆定律（E=IR），回路中电阻的增加于瞬间引起电压变化而出现一个脉冲信号（通过脉冲），脉冲振幅大小反映血细胞体积大小，脉冲数量反映血细胞个数。 图1 电阻抗法细胞分析原理图 1.2流式细胞术 流式细胞术(flow cytometry，FCM)是一种综合应用光学、机械学、流体力学、电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术，使被测溶液流经测量区域，并逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性，从而对高速流动的细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析的联合检测方法。 首先，待测细胞经处理或染色后被压人流动室，与此同时，不含细胞的缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管人口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能被包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在包绕下单行排列，依次通过检测区域.在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。这两个光源信号分别反映了细胞体积的大小和内部的信息。经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模，数转换器.将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号，经计算机处理，可将分析结果显示在屏幕上。 为了保证细胞单个排列地逐一通过检测区域，鞘流技术在流式细胞术中被广泛应用。鞘流技术是对流体粘性定律和层流理论在医学上应用的特殊称谓，意思是一种液体象刀鞘一样包裹着细胞的流动。对于起包裹作用的液体被称为鞘液，以与样本液区别。其示意图如图2所示。根据层流理论，由于两种液体的流速和压力不同。在一定条件下样品溶液与包裹它的鞘液在流动中可以保持相互分离并且同轴。同时鞘液流可以加速样品溶液中颗粒的流