分子医学实验方法.ppt

mRNA的定量检测——实时定量RT-PCR（REAL TIME RT-PCR） Real time PCR是一种定量PCR技术，用于定量测定特定基因的起始模板数。 当模板为来自mRNA反转录的产物cDNA时，可用于定量测定mRNA的模板数，从而确定特定基因的表达水平 实时PCR与普通PCR的区别 普通PCR技术： 在PCR结束后对终点产物（电泳图谱）进行定量分析。 实时定量PCR技术： 实时监测PCR扩增，在扩增的指数期对起始模板进行定量。（荧光积累与扩增产物及模板拷贝数成比例关系） 原理 原位杂交 一种用单链RNA或DNA探针通过分子杂交对细胞或组织中的基因或mRNA分子在染色体、细胞、组织或整个生物体上进行定位的方法。可用于分析基因表达的组织特异性和基因表达水平。 探针可以是同位素标记或非同位素标记的。 荧光原位杂交（FISH） In situ hybridization of TRPM8 mRNA to a prostate adenocarcinoma. 4 μm sections were hybridized with the TRPM8 probe used in Northern and dot blot experiments. A) and B) hybridization of the antisense TRPM8 probe to an a