免疫学实验,凝集反应。MicrosoftPowerPoint演示文稿.pptVIP

实 验 要 求 与 实 验 室 规 则 临床免疫学实验指导 第一部分 抗原抗体反应 （Antigen-Antibody Reaction） 抗原抗体反应概念： 是指相应的抗原-抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。 主要应用： 1.用已知抗原检测未知抗体，抗体效价 2.用已知抗体检测未知抗原，明确病原生物 抗原-抗体结合反应常用实验方法： ◆ 凝集反应 ◆ 沉淀反应 ◆ 补体结合实验 ◆ 免疫标记实验技术 实验目的：掌握抗原抗体结合反应的原理，方法及其应用 第一节 凝集反应（Agglutination） 抗原抗体反应示意图 定义： 凝集反应指细菌、红细胞等颗粒性抗原或表面覆盖抗原的颗粒状物质(如红细胞、聚苯乙烯胶乳等)，与相应抗体结合，在一定条件下，形成肉眼可见的凝集团块现象。 实验目的： 掌握抗原抗体结合反应的原理，方法及其应用 属免疫学最简单最直接最常用的基础实验 【实验内容】 玻片凝集： 常用已知抗血清检测未知抗原，定性 试管凝集：可检测未知的抗原或抗体并能报告凝集效价 一、玻片凝集反应（定义） 当颗粒性抗原与相应的抗体发生特异性结合时，两者 比例适宜，在电解质溶液中呈现肉眼可见的颗粒状 凝集，此现象称凝集反应。 一、玻片凝集反应 【实验材料】 1. 1:20痢疾免疫血清，1:20伤寒免疫血清。 2. 伤寒沙门菌菌液，痢疾志贺菌菌液。 3. 生理盐水，玻片，微量移液器，消毒缸等。 【方法】 1. 取洁净玻片2张，各用记号笔划分三等份。 2. 在玻片的左上角分别标记1和2。 3. 按下列要求依次加入反应物。各种加量均为20微升 4. 转动玻片，充分混匀1-2min后观察反应结果并作出解释。 解释说明出现凝集和不出现凝集的依据。 ● ● ● ●  二、试管凝集反应【实验原理】 将待检血清作对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检血清混合，抗原与不同稀释度的抗体在试管内直接结合而出现的凝集现象称为试管凝集反应。此法是一种半定量法。 常用已知抗原(如细菌悬液，RBC悬液)来测定被检血清中 相应抗体的水平(效价或滴度)。 用于检测被检血清中是否存在和已知抗原相应的抗体 及抗体的效价：如；患者血清中免疫性抗体检测。 例如 孕妇血清中免疫性IgG检测，用于新生儿溶血病的诊断、 病毒感染后，患者抗病毒抗体产生情况的观察 【材料】 1．1:20伤寒免疫血清。 2．伤寒沙门菌菌液，甲型副伤寒沙门菌菌液。 3．生理盐水，TIP头，微量移液器， 4. U型微量反应板。见下图 5．恒温培养箱等。 方法: 取U型微量反应板，做好标记，加样 小心加样！ 取U型微量反应板（做好个人或小组标记） 于两横排1～10孔中各加入生理盐水 每孔50μl。 分别在两横排的第1孔内加入1:20伤寒免疫血清 50μl， 每排各从第1孔开始作对倍稀释至第9孔， 从第9孔混匀后弃去50μl。 第一横排从第10孔至第1孔各加入伤寒沙门菌菌液50μl/孔 第二横排同法各加入甲型副伤寒沙门菌菌液50μl/孔。 充分混匀后，置45℃恒温箱孵育1h后取出。 室温静置15min，最好在黑色背景下，观察并报告结果。 血清对倍稀释方法： 用微量移液器将第1孔的溶液连续吸吹三次，使其充分混匀。吸出50μl移入第2孔 。同法吸吹三次使充分混匀后再吸出50μl移入第3孔，如此作对倍稀释至第9孔，吸吹混匀后吸出50μl弃去。此时第1～9孔的血清稀释度依次增加一倍，即血清对倍稀释法或倍比稀释法。 注意：做倍比稀释吸取时插到管底，吹出时离开 液 面，沿孔壁吹出。动作要连续轻巧，切勿出错  孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 生理盐水（μl） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 1:20伤寒 50 50 50 50 50 50 50 50 50 — 免疫血清（μl）