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* RNA的提取与电泳 * RNA的提取与电泳 实 验 三 动物组织总RNA的提取与电泳 四川大学基础医学与法医学院生物化学与分子生物学 廖英 1. 实验目的和要求 2. 相关基础知识 3. 实验方法、步骤和注意事项 一. 实验目的和要求 掌握RNA制备以及常用鉴定方法的原理、操作步骤、注意事项和技术关键。 二. 相关基础知识 1. RNA的种类和作用 　 细胞内的RNA主要是 rRNA、tRNA及mRNA和小分子RNA 。rRNA含量最丰富，由2８S、18S、5.8S和5S几类组成。mRNA种类繁多，分子量从数百至数千碱基不等。 RNA是基因表达过程中非常重要的生物分子，如mRNA, 它携带了DNA的全部编码信息。RNA的分离是研究基因功能的重要基础之一，在分子生物学中占有重要的地位。 　　 2. 应用 总RNA制备在分子克隆中有广泛应用，可用于： 1 Northern blotting 2 通过 Oligo (dT) 制备 mRNA 3 通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）建立 　　cDNA文库 4 用于消减杂交和消减文库的构建，筛选差异 　　表达基因 5 体外蛋白质的生物合成 苯酚法：用SDS变性蛋白并抑制RNase活性，经多次酚/氯仿抽提除去蛋白、多糖、色素等后，用NaAC和乙醇沉淀RNA