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实验二 植物基因组DNA的分离纯化及RAPD扩增 1、植物基因组DNA的分离纯化 一、实验原理 核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA是双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器 DNA为双链环状分子，有些噬菌体DNA有时为单链环状分子。95%的真核生物DNA 主要存在于细胞核内，其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。 从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA，即核 糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。 盐溶法是提取DNA的常规技术之一。在制备核酸时，通常是用研磨破坏细胞壁和 细胞膜，使核蛋白被释放出来。利用DNA不溶于0.14mol/L 的NaCl溶液而RNA能溶 于0.14mol/L 的NaCl溶液这一性质可以将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞 液中分开。 分离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等杂质除去。去除蛋白的方法有 3种：① 用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除 去变性蛋白质。用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。② 用 十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，从而使其与核酸分离，也可 从