核酸等温扩增-杨银辉教学内容.pptVIP

核酸等温扩增技术在病毒检测中的应用 军事医学科学院微生物流行病研究所 杨银辉 核酸等温扩增技术 核酸等温扩增的种类 环介导核酸等温扩增技术（LAMP） LAMP引物设计原则 LAMP扩增引物设计 LAMP扩增过程 环引物在茎环结构环状结构处识别并不断延伸，使双链过早打开，有利于复杂茎环结构的成环和外引物置换作用。这一定程度上加速了整个 LAMP 扩增循环阶段的反应。 LAMP的操作过程 检测方法 LAMP技术在病原体检测中的应用 LAMP技术小结 LAMP技术的优点 存在缺陷 所识别的靶位序列长度不得过大，一般在300 bp 以内。因此，无法进行长片段 DNA 的扩增； LAMP 技术具备高灵敏度，对操作要求严格分区，否则极易受到污染而产生假阳性结果； LAMP 的反应结果只有两种即扩增与不扩增，故在产生非特异性扩增时是难以进行后续鉴定的； 产物相当复杂，无法进行后续的回收、鉴定、克隆等基因工程操作。 NASBA的优缺点 NASBA 是种 RNA 扩增法，因此其主要应用是对 RNA 病毒的检测。 整个反应能在 42℃条件下进行，经过两个小时的扩增可将模板 RNA放大至 109~1010倍。 灵敏度高、特异性强、保真度高。 反应成分复杂、需要三种酶导致成本偏高、须重复加入逆转录酶和 T7 RNA 聚合酶。 滚环放大(rollingcircle amplificatio