赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程.doc

赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程 1．目的 规范赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程。 2．原理 某些细菌能产生氨基酸脱羧酶，使该种氨基酸脱去羧基，生成胺（如赖氨酸→尸胺，鸟氨酸→腐胺，精氨酸→精胺），从而使培养基变碱性，指示剂变色。 3．试剂 3.1 基础液成分 蛋白胨 5g 牛肉浸膏 5g 溴甲酚紫 0.1g 甲酚红 0.005g 吡躲醛（VB6） 0.005g 葡萄糖 0.5g 蒸馏水 1000ml 3.2 制备 基础液加热慢慢溶解，按1％浓度加入赖氨酸，调PH至6.0，呈深亮紫色。分装每支4ml，同时配对对照管（不加氨基酸），置120℃灭菌15分钟，冷却后冷藏备用。 4．质控 大肠埃希菌ACTT 25922为紫色，福氏志贺菌CMCC51573为黄色。 5.操作步骤 挑取纯菌种接种于含赖氨酸的培养基及不含氨基酸的对照培养基中，加无菌石蜡油覆盖，35℃孵育4日，每日观察结果。 6.结果判断 若仅发酵葡萄糖显黄色，为阴性；由黄色变为紫色，为阳性。对照管为黄色。 7.注意事项 7.1 由于脱羧酶培养基含有蛋白胨，培养基表面的蛋白胨氧化和脱氨基作用可产生碱性反应，所以培养基应密封。隔绝空气，以消除假阳性反应。 7.2 不含氨基酸的空白对照管，孵育18～24小时后，仍保持黄色（发酵葡萄糖）。 8.临床意义 沙门菌属中除甲型沙门菌赖氨酸反应阳性，志贺菌属和枸橼酸杆菌属均为阴性。