沙门菌血清学检测标准操作规程.doc

沙门菌血清学检测标准操作规程 1．目的 规范沙门菌的血清学检测标准操作规程。 2．原理 用已知的沙门菌诊断血清在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为沙门菌。 3．试剂 沙门菌诊断血清，生理盐水。 4．质控 伤寒沙门菌ATCC50096阳性；大肠埃希菌ATCC25922阴性。 5.操作步骤 5.1 首先用可疑菌与沙门菌O多价血清(A-F)进行凝集，若呈明显凝集，提示被检菌株可能属于A-F6个O群范围之内，再用H因子血清第一相（特异相）定型，最后用H因子第二相（非特异相）辅助定型。 5.2 若生化反应符合沙门菌，但A-F多价血清不凝集，首先考虑是否存在表面抗原（Vi抗原），因为Vi抗原能阻断O抗原与相应抗体发生凝集，加热可将其破坏。应将细菌制成菌悬液，放入沸水中加热15～30分钟，冷却后再次做凝集试验。若去除Vi抗原后仍不凝集，此时应考虑是否为A-F以外菌群，应送专业实验室进行鉴定。 6.结果判断 阴性：试验一侧及对照一侧均为混浊。阳性：对照一侧均为混浊，试验一侧明显凝集。自凝：试验一侧及对照一侧凝集。 7.注意事项 伤寒沙门菌菌体表面常有一层Vi抗原。它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集，从而导致假阴性结果。此时应将菌悬液于100℃中煮沸1小时，以破坏Vi抗原，然后再做试验。 8.临床意义 主要用于沙门菌属的鉴定。