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第九章 基因表达的调控 陈龙 生命科学与技术学院 2013. 09. 01 大纲 9.1 基因调控的原则 9.2 原核生物的基因调控 9.3 真核生物的基因调控 9.1 基因的调控原则 9.1 基因的调控原则 几个概念： House-keeping genes （持家基因） Constitutive gene expression （组成性基因表达） Regulated gene expression （可调节性基因表达） Inducible gene expression （可诱导的基因表达） Induction （诱导） Repression （基因的阻遏） 9.1 基因的调控原则 RNA聚合酶与DNA在启动子区结合，并在启动子部位起始转录。 启动子核酸序列影响到其与RNA聚合酶的结合亲和力及转录起始的频率。如：持家基因。 非持家基因启动子部位的转录起始频率受到启动子序列和调节蛋白的双重调控。 9.1 基因的调控原则 三种类型调节蛋白： 特异性因子：改变RNA聚合酶与启动子结合的特异性； 阻遏蛋白：阻碍RNA聚合酶与启动子的靠近； 激活因子：增强RNA聚合酶与启动子的相互作用。 9.1 基因的调控原则 特异因子： 大肠杆菌聚合酶全酶的σ亚基。如：热胁迫时，σ70会被σ32代替； 真核细胞中，TATA结合蛋白。 9.1 基因的调控原则 9.1 基因的调控原则 原核基因以操纵子单位调节： 操纵子：簇集基因与启动子再加上共同行使调节功能的额外序列。 原核生物中，一个操纵子可调控多个基因。 9.1 基因的调控原则 Lac操纵子：主要操纵基因O1，假操纵基因O2和O3. 要使Lac操纵子阻遏，阻遏蛋白既要与主要操纵基因结合，还要与其中之一次级操纵基因结合。 Lac基因的诱导：别乳糖（Allolactose） 9.1 基因的调控原则 调节蛋白：与特异的DNA序列结合，含有与DNA结合明显可辨的结构域，这些结构域含有与DNA紧密而特异作用的亚结构。 作用力：氢键，通常发生在DNA大沟，可以区分碱基对，少数结合在DNA小沟，但不容易区分碱基对。 蛋白质能以多种方式识别每一碱基对，不存在简单的氨基酸与碱基结合的密码。 9.1 基因的调控原则 调节蛋白的DNA结合位点通常是回文结构。 Lac操纵子是四聚体（两个二聚体），其中一个二聚体通常与O1结合，另外一个与O2或O3结合。 O1操纵基因序列的对称性与两个成对的Lac阻遏蛋白亚基的二重对称轴相同。 9.1 基因的调控原则 DNA结合模体，如：螺旋-转角-螺旋和锌指结构。 9.1 基因的调控原则 螺旋-转角-螺旋存在于许多原核生物的调节蛋白中，一些真核生物调节蛋白中也存在。两个螺旋节段中的一个叫识别螺旋，与DNA以序列特异方式相互作用，通常位于或接近大沟。 锌指长度大约30个氨基酸，其中4个（4个Cys，或2个Cys和2个His）与Zn2+配位。 Zn2+起到稳定此模体的作用。一个DNA结合蛋白中通常有多个锌指结构。锌指结构多存在于真核蛋白质中。 发育同源结构域（60个氨基酸），在同源异性基因中发现，高度保守。 9.1 基因的调控原则 调节蛋白中不仅有DNA结合结构域，而且还含有蛋白-蛋白互作结构域。 介导蛋白-蛋白相互作用的模体有几种常见类型，其中最重要的两个是亮氨酸拉链和碱性螺旋-环-螺旋。 亮氨酸拉链，每七个位置出现一个Leu，在疏水表面形成一条直线。含亮氨酸拉链的蛋白中通常有一个独立的与DNA结合的结构域。 9.1 基因的调控原则 9.1 基因的调控原则 碱性螺旋-环-螺旋，对DNA结合与蛋白质二聚化重要，50个氨基酸残基的保守序列。含有该模体的蛋白，与DNA的结合是由临近的富含碱性的氨基酸残基的短氨基酸序列介导的。 9.2 原核生物基因的表达调控 代谢阻遏机制，如：葡萄糖的存在阻遏了乳糖代谢酶的表达。这种效应是由cAMP和cAMP受体蛋白（CRP）介导的。 CRP为同源二聚体，DNA和cAMP结合位点，此结合由螺旋-转角-螺旋模体介导。 当没有葡萄糖存在时，CRP与lac启动子附近位点结合，可提高转录效率50倍。CRP对葡萄糖水平是正调控因子，Lac阻遏蛋白对乳糖水平是负调控因子，二者协同作用。 9.2 原核生物基因的表达调控 9.2 原核生物基因的表达调控 大肠杆菌的阿拉伯糖操纵子： AraC既能行使正调节，也能行使负调节。 通过阻遏自身基因的转录，此蛋白能调节自身的合成。 某些调节性DNA序列能在一定距离外起作用。 ara操纵子包括：三个基因（合称araBAD），两个操纵基因（araO1和araO2）的一个调节位点，ara I（Ara C的结合位点），启动子PBAD。 ara操纵子的转录受到CRP-cAMP的调节。 9.2 原核生物基因的表达调控 9.2 原核生物基因的表达调控