肠癌SW480细胞TLR4与协同刺激分子B7-H3表达的初步分析.pdfVIP

肠癌SW480细胞TLR4与协同刺激分子B7q-13表达的初步研究 中文摘要 肠癌SW480细胞TLR4与协同刺激分子B7一H3 表达的初步研究 中文摘要 探讨siRNA对TLR4的干扰效率及TLR4、B7--H3表达的影响。 生长期结肠癌SW480细胞，离心柱法提取细胞RNA，实时荧光定量PCR方法分别 检测TLR4与B7--H3的表达水平，每个浓度点设3个复管，分别建立标准曲线与熔解 曲线；2．siRNA干扰TLR4表达实验体系的建立及其干扰效率的研究。取对数生长期 siRNA 结肠癌SW480细胞，以2x105个IIL接种于6孔板进行转染，用不同浓度TLR4 心柱法提取细胞RNA，紫外分光光度剂检测总RNA含量和质量。各取lug总RNA 的最佳转染时间与转染浓度。根据最佳转染条件进行TLR4与B7-H3荧光实时定量 PCR检测与普通PCR琼脂糖凝胶电泳产物分析。 熔解温度为90C，三个基因片段的熔解曲线均呈单峰，扩增曲线呈典型的S型动力 Ct值为27．72，较未干扰组(25．96) 学曲线；2．siRNA在24h、80nmol／L时，TLR4 siRNA siRNA组相比，TLR4 明显增加，差异有统计学意义(PO．01)。与阳性对照组、NC 组TLR4、B7-H3 Ct值明显增高，差异有统计学意义(PO．01)，其余两组间比较差异 siRNA组在PCR扩增时TLR4、 无统计学意义(PO．05)。琼脂糖凝胶电泳显示TLR4 B7--H3不能明显被检出，而阳性对照组、NCsiRNA组则扩增条带清晰。 中文摘要 结论 Ⅱ The ofTLR4and molecularB7-H3 incoloncancer preliminiary costimulatory expression study SW480—c—ells——A——b—strac—t— TLR4and The of preliminiarystudy cells molecularB7-H3 incoloncancerSW480 expression Abstract illustratethe ofTLR4and molecularB7-H3 Objective：To expression costimulatory cellline．To the ofTLR4siRNA inhumancoloncancer investigateinterferingefficiency andtheeffectofthesilenceonTLR4andB7-H3 expression． Methods：1．Toestablish