第10章DNA的生物合成.pptVIP

第十章 核酸的代谢 第二节 DNA的生物合成 核酸是生命遗传信息的携带者和传递者 一、参与DNA复制的酶及蛋白因子 （一） DNA聚合酶（DNA polymerase, DNA pol） 以dNTP为底物，以DNA为模板，需要一段引物，从 引物的3-OH末端合成DNA新链。 三种大肠杆菌DNA聚合酶 1. DNA聚合酶I(1956,Arthur Kornberg) 外切酶活性：3′ 5′外切活性具有校正作用； 5′ 3′切除引物和DNA损伤的修复； 聚合作用：合成速度较慢，每秒10个核苷酸，而且新 链长20个核苷酸后，酶即脱离模板。 2. DNA聚合酶Ⅱ 外切酶活性：3′ 5′外切活性 聚合作用： 5′ 3′补小缺口（100核苷酸） 3. DNA聚合酶III 大分子寡聚酶，10种22个亚基组成。每种亚基都有2个，整个分子形成一个不对称的二聚体 DNA聚合酶Ⅰ 多功能酶 5’ 3’外切酶 3’ 5’外切酶 5’ 3’聚合酶 单链多肽（Zn2+） 大小二个片段 切除RNA引物， 填补空缺 损伤后修复 DNA聚合酶Ⅲ 多功能酶 5’ 3’聚合酶 3’ 5’外切酶 不对称二聚体 单体1-前导链/单体2-随从链 DNA复制的主要酶 高续进性 高聚合酶活性 高产物真实性 真核细胞DNA聚合酶 哺乳动物中已发现5种 DNA pol α、β、γ、δ、ε polα和δ——新链的延长 Polβ——DNA的重组修复 polγ——线粒体的复制，还具3’ 5’ 外切活性 Polε——聚合作用和3’ 5’ 外切活性 （二）DNA连接酶（DNA ligase) DNA双螺旋中一条链有缺口，并且3’-OH与5’-P相邻 特异性不高， 在DNA不连续复制、重组及损伤修复中起作用 哺乳动物：ATP辅酶，大肠杆菌：NAD辅酶，都需要Mg2+ 连接方式：酶先与ATP或NAD形成酶—AMP，酶—AMP与5’-P形成焦磷酸而活化 （三）与解除DNA高级结构有关的酶与蛋白因子 1.拓扑异构酶 拓扑性质—物体或图像做弹性移动时保持物体图像不 变的性质。DNA三级结构具有拓扑性质。 Ⅰ型酶：使一定部位的一条链切口-封口反应 Ⅱ型酶：DNA两条链同时发生切口-封口反应 Ⅱ型酶还可使DNA形成超螺旋 （三）与解除DNA高级结构有关的酶与蛋白因子 2.解螺旋酶 依赖DNA单链存在，对单链亲和力强 大肠杆菌中发现多种与解除螺旋结构有关的蛋白质DnaA,DnaB,DnaC协同作用，解开DNA。 （三）与解除DNA高级结构有关的酶与蛋白因子 3.单链结合蛋白（SSB） —与解开的DNA单链结合后，两条DNA链就不能形成双螺旋； —还可以防止核酸酶的降解； —原核生物中SSB与DNA单链结合表现正协同效应。 （三）与解除DNA高级结构有关的酶与蛋白因子 4.引发酶（primase） 多数以RNA片段为引物，也存在DNA片段引物、tRNA引物 ——促进引物合成的酶称为引发酶 （三）RNA引物 DNA聚合酶 不能催化两个游离dNTP在DNA模板上聚合 需要具3’-OH的引物 RNA聚合酶 能催化两个游离NTP在DNA模板上聚合 提供3’-OH 引物最后被DNA聚合酶Ⅰ除去、补满，再由连接酶连接 二、DNA的复制 1、半保留复制方式 通过DNA复制形成的新DNA分子, 与原来的DNA分子完全相同。 经过一个 复制周期后，子代DNA分子的两条链中，一条来自亲代DNA分子，另一条是新合成的，所以又称为半保留复制。 2.DNA半不连续复制 至今发现的DNA聚合酶只能催化从模板的3′端向5′端前进的反应。 冈崎（1968）等人的实验： 用噬菌体T4感染的大肠杆菌作为实验材料，以3H标记的胸苷合成DNA.短时间内测定同位素的掺入情况。 实验结果：短时间（2S）标记出现在分子质量较小的片段，只有在标记时间长（30S以上）才出现在分子质量较大的片段。 冈崎片段——DNA合成是不连续的，先合成一些DNA小片段，其大小约含1000-2000个核苷酸残基，然后再通过 DNA连接酶将它连接起来。 二、DNA的复制 3、DNA的复制过程 （1）合成起始 a.辨认起始点 DNA复制有固定的起始点。 大肠杆菌：OriC含245bp,有两个区域起关键作用，4个9核苷酸重复序列；3个13核苷酸重复序列（富含AT）。 二、DNA的复制 b.模板DNA解除高级结构 dnaA蛋白与起始点形成复合物，促进其他dna蛋白也与起始点形成复合物。一旦双螺旋解开成单链，SSB即结合单链。 TopoⅡ在打