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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只有被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用 原理 1个菌落→1个活菌 二、实 验 设 计 三、结果分析与评价 四、课 题 延 伸 4、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是 ( ) ①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线消毒 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法 A.⑤③②①④⑥ B.①②③④⑤⑥ C.⑥②③④①⑤ D.③④②①⑥⑤ 解析：培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。 5、某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种、培养及菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题。 (1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。 (2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_________________。 * 脲酶 课题背景 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 1、实例：PCR技术 启示： 原因： PCR技术：要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 （一） 筛 选 菌 株 筛选： Taq细菌 因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物。 寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 2、实验室中微生物的筛选原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 能。只有产生脲酶的 细菌能利用尿素作为氮源而生存。 能分解尿素的细菌的筛选 根据培养基配方，回答下列问题： 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板等方法对它进行纯化培养分离。 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 方法 运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。 （二） 统计菌落数目 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30—300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值，需培养计算出三个或三个以上的平板菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 注意事项 阅读教材22页“（二）统计菌落数目”一段，并讨论教材中提出的问题。 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 计算公式： 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M （三） 设 置 对 照 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 阅读P22～23页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出的问题。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 小结： 菌落 计数 制培养 基 样品稀释 涂布平板 土壤取样 准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。 相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 （1）制培养基 （2）土壤取样 ? 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去（铲已经过消毒