食物中还原型抗坏血酸测定.docVIP

PAGE PAGE 1 实验四 食物中还原型抗坏血酸测定 （2,6—二氯酚靛酚法） 【教学目的与要求】 1．学习定量测定食物中还原型维生素C的原理和方法； 2．熟悉食品样品的制作方法； 【原理】 2,6—二氯酚靛酚（下简称2,6染料）在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。还原型抗坏血酸具有还原2,6染料的能力。故将2,6染料滴入含有抗坏血酸的酸性溶液时，由于该染料被还原而变无色，继续滴加2,6染料，直至抗坏血酸与2,6染料作用完毕时，当过量一滴染料时，溶液即呈红色。在没有杂质干扰时，溶液还原染料的量与抗坏血酸的量成正比。从2,6—二氯酚靛酚标准液的消耗量，即可计算出样品中抗坏血酸含量。 【器材】 匀浆机、电子天平、纱布、滤纸、烧杯、100ml具塞量筒、手术剪或菜刀砧板、漏斗、5ml吸管，50 ml三角烧瓶，2 ml微量滴定管，滴定架，吸管架，吸耳球等。 【试剂】 1．2%草酸溶液：称取20g草酸溶于蒸馏水中，稀释至1000mL。 2．1%草酸溶液：称取10g草酸溶于蒸馏水中，稀释至1000mL 3．6%碘化钾溶液：称取碘化钾0.6g溶解于10ml蒸馏水中。临用前配制。 4．1%淀粉指示剂：称取0.5g可溶性淀粉，加水1滴，搅拌成糊状后倒入50ml沸水中，混匀 5．0.001mol/L 碘酸钾标准溶液：称取0.2140g 碘酸钾（105℃烘干2小时），蒸馏水溶解定容至100ml，此为0.01mol/L 的碘酸钾标准储备液。使用时稀释10倍，即为 6．抗坏血酸标准液 溶解20mg抗坏血酸结晶于1%草酸中，并稀释至100 ml。取其中5 ml再稀释至50 ml，该抗坏血酸标准液1 ml含抗坏血酸0.02mg。抗坏血酸不稳定，用时现配。使用前要标定Vc浓度。 7．0.02%2,6—二氯酚靛酚溶液 称取50mg2,6—二氯酚靛酚溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热溶液中，冷却后稀释至250ml，过滤后装在棕色瓶内，保存于冰箱中，每周标定一次。标定方法：取5ml抗坏血酸标准液，加1%草酸5ml，用0.02% 2,6—二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色能存在15秒为终点。计算1ml0.02% 2,6—二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸多少毫克。 【标定】 抗坏血酸标准溶液的标定：吸取抗坏血酸标准溶液2ml于50ml三角瓶中，加入1%草酸溶液5ml，6%KI溶液0.5ml，1%淀粉溶液2滴，用0.001mol/L 碘酸钾标准溶液滴定至溶液为浅蓝色为止。用下式计算抗坏血酸浓度。 消耗0.001 mol/L 碘酸钾标准溶液的ml数×0.088 抗坏血酸浓度(mg/ml)= —————————————————————— 所取抗坏血酸ml数 2．2,6-二氯酚靛酚溶液标定：取已标定抗坏血酸标准液5ml，加1%草酸5ml于三角瓶中，用待标定的0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液（下称染料）滴定至溶液呈淡红色，15秒内不褪色为终点。计算1ml0.02% 2,6—二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸多少毫克。 抗坏血酸浓度（mg/ml）×抗坏血酸的ml数 1ml染料相当于抗坏血酸的mg数＝—————————————————————— 滴定消耗染料的ml数 【操作步骤】 1．样品处理： 1．1 新鲜样品剪碎后取20g于捣碎机中，加入等量（20ml）的2%草酸溶液，制成匀浆 1．2 用1%草酸溶液将匀浆液洗入100ml具塞量筒中，并定容。若泡沫过多可加数滴异戊醇除去。 1．3 用4层纱布过滤匀浆液。若滤液有色，可按20ml滤液加1勺白陶土振摇几次脱色。静置取上层液滴定或用滤纸过滤后滴定。 2．滴定 吸取滤液5.00于50ml三角瓶中，用2,6-二氯酚靛酚钠标准溶液滴定至浅红色，在15秒内不褪色为终点。取等量2%草酸溶液代替样品用2,6-二氯酚靛酚钠滴定为空白对照。 【计算】 式中： V1──滴定食物样品时所用2,6—二氯酚靛酚溶液的量，ml； V2──滴定蒸馏水时所用2,6—二氯酚靛酚溶液的量，ml； T──1ml2,6—二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的mg数； W──滴定时所用样品液中含样品的量，g. 【注意事项】 1．2,6-二氯酚靛酚的体积一般在1～4ml之间，Vc含量高时，可稀释或减少用量。 2．滴定要迅速，不超过2分钟。