凝胶层析法分离酪蛋白与核黄素.pptVIP

2. Gel Chromatography Separate Casein and Riboflavin by Sephadex G-75 Purpose basic operation of gel chromatography (凝胶层析) principle of separating riboflavin (核黄素) and casein by Sephadex G-75 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience principle 1. Conception Gel chromatography,?in?analytical chemistry, technique for separating chemical substances by exploiting the differences in the rates at which they pass through a bed of a porous, semisolid substance (gel). The method is especially useful for separating enzymes, proteins, peptides, and amino acids from each other and from substances of low?molecular weight.? Gel Chromatography Gel Filtration (Porath,Flodin,1959) Gel permeation chromatography (GPC) Size-exclusion chromatography (SEC) molecular sieve chromatography (Hjertén,Mosbach,1962) exclusion chromatography (Pedersen, 1962) 2. 固定相（凝胶） 三维空间网状结构 交联剂越多 交联度越大 网孔结构越紧密 交联剂越少 交联度越小 网孔结构越疏松 Sephadex? Beads are prepared by cross-linking dextran (葡聚糖) with epichlorohydrin (环氧氯丙烷). Widely used in industrial processes. Also useful in desalting (脱盐) and buffer exchange. Sephadex的分级范围 G10 700 G15 1,500 G25 1,000 ~ 5,000 G-50 1,500~30,000 G-75 3,000~70,000 G100 4,000 ~150,000 G150 5,000 ~400,000 G200 5,000 ~800,000 吸水性 *G类的型号 —每克干凝胶吸水量（ml）x 10 *如G-75 —每克干凝胶吸水量为7. 5 ml 样品 固 定 相 流 动 相 小分子 被延滞 小分子 大分子 较快流出 molecular sieve effect (分子筛效应) Ve -Vo Kd = ———— Vi 分配系数Kd ： 特点： （1）与被分离物质分子的大小和凝胶颗粒孔隙的大小有关 （2）与柱的长短粗细无关 每个溶质分子在流动相和固定相之间有一个特定的分配系数 (Kd) 应 用 脱 盐 测分子量 分离纯化 Ve Albumin NaCl Ve Ve 优点 缺点 凝胶层析的优缺点 凝胶是一种不带电荷的惰性载体，结构稳定 要求样品和洗脱液的粘度很低 操作条件较温和 凝胶颗粒网络孔径大小有限,可被纯化物质的分子量范围受限制 样品得率高,重复性好,可进行大量分离纯化 凝胶结构对某些分子具有吸附作用 (1) 棉花装填量及松紧度适中； (2) 凝胶不能有气泡和分层现象； (3) 装柱结束后保持凝胶表面平整。 1. 装柱 使用滴管，柱床表面以上洗脱液不得流干。 Notes 2. 洗脱 3. 加样 (1) 洗脱液液面与凝胶柱床表面相切，关闭出口； (2) 加样时使用滴管，尽量不破坏凝胶表面； (3)