水产动物育种学第七章细胞融合和核移植.pptVIP

Removal of the nucleus surrounded by a small amount of ooplasm from a mouse germinal vesicle oocyte. Takeuchi T et al. Hum. Reprod. 1999;14:1312-1317 ? European Society of Human Reproduction and Embryology Oocyte in the process of nuclear transfer * 然后用发圈拨动去核卵，使胚盘朝上，再把已吸有细胞核的吸管对准此胚盘的近中央处剌入，并把细胞核（连同核外微量细胞质一起）注入胚盘内。 A grafted oocyte (couplet of a karyoplast and cytoplast) aligned between two microelectrodes. Takeuchi T et al. Hum. Reprod. 1999;14:1312-1317 ? European Society of Human Reproduction and Embryology 核移植操作系统 鱼类核移植杂种细胞由于卵外胶膜被破坏，需在等渗的Holtfreter液中培养一段时间，然后逐渐转入低渗溶液，早期胚胎发育过后可入曝气水中培养。 4.核质杂种细胞的培养 三、细胞核移植技术的应用 1.培育新品种——获得核质杂种 2.冲破远缘杂交难以进行和杂交后代不育的屏障 3.保持并复制优良个体的基因型 4.产生雄核纯合二倍体 5.基础研究 1.培育新品种——获得核质杂种 1980年，中科院动物研究所细胞遗传研究组的鲤鲫移核鱼，表现出部分父母的性状。在生长优势、蛋白质含量上超过双亲，表现出明显的优势。 1981年，童第周将培养30多天的成熟银鲫的肾细胞核移入去核卵中，得到1尾性成熟的银鲫，时称“试管鱼”。这是世界第一例体细胞核移植克隆的脊椎动物。 对荷包红鲤核与鲫细胞质杂交的移核鱼子一代、子二代、子三代生长趋势的观察，以及对子三代的生产性能对比试验证明， 子三代比作为供体核的荷包红鲤生长速度快14.74-22.47％，养殖产量高22％，肌肉蛋白高3.78％，含脂量低5.88％。当年鱼苗即能养到商品规格，具有良好的经济效益和生产推广价值。 颖鲤 颖鲤是采用细胞工程技术与常规杂交技术的有机结合新的综合育种方法而获得的育种新秀，80年代培育而成的。 该法是先将荷包红鲤核移入鲫去核卵，获得鲤鲫移核鱼，以鲤鲫移核鱼第二代为父本，黑龙江的散鳞镜鲤为母本杂交，其杂交种即是颖鲤。 颖鲤具有生长快、含肉率高、肉质细嫩、味道鲜美、抗寒力强、容易起捕等优良性状。与其他杂交鲤相比，生长速度快30％以上，当年可达1-2公斤(长江以南地区)。 当年颖鲤个体增重比父本快67％，比母本快27.1％，体内蛋白质含量比双亲高1-1.4％，可见颖鲤具有较强的生长优势和营养性能。 2.冲破远缘杂交难以进行和杂交后代不育的屏障 – 杂交是培育新品种的方法之一，有些杂交在自然界是无法直接进行的。 – 比如鳑鮍鱼♀×金鱼♂在自然条件或人工受精条件下均无法进行杂交，可通过核移植却可以得到0.5%左右的幼鱼。 雄鰟鮍准备排出精子 3.保持并复制优良个体的基因型 优良个体的基因型保持很难 借助细胞核移植技术可以将这种优良的基因型保持下去（相当于无性繁殖） These 19 identical male albino frogs were prepared by nuclear transplantation into unfertilized eggs of the dark green female frog. (Male frogs are about half the size of females.) 4.产生雄核纯合二倍体 刘汉勤等（1987），通过核移植的办法得到了普通泥鳅的雄核二倍体。 优点是去除隐性有害的基因，在较短的时间内得到纯系。 普通泥鳅的雄核二倍体 2n=48♀×2n=100♂ 去除受精卵的雌核 泥鳅雄核、大鳞副泥鳅卵质的单倍体胚胎 将囊胚细胞的核移植到大鳞副泥鳅的去核卵中 5.基础研究 （1）探讨发育机制和核质关系 动物的发育不但与细胞核有关，还受到细胞质的影响。 （2）研究细胞核发育的全能性 （3）细胞核移植技术和基因打靶技术（gene targeting）、胚胎干细胞技术相结合，可以提高转基因动物的生产效率。 * * 将人细胞用红色荧光标记 将小鼠细胞用绿色荧光标记； 然后通过某种方法（如可以用电流刺激或用灭活的仙