血液中伊马替尼定量检测技术.PDFVIP

血液中伊马替尼定量检测技术 前言 甲磺酸伊马替尼（imatinib mesylate ，1 甲磺酸盐）为脂溶性酪氨酸激酶抑制剂，它具有阻断一种或多种蛋白激 酶的作用，临床用于治疗慢性髓性白血病和恶性胃肠道间质肿瘤。在慢性髓性白血病治疗中，过高的血药浓度可能 预示着该病患者远期疗效欠佳，会出现耐药的可能性。对于恶性胃肠道间质肿瘤而言，尽管大多数患者对1 表现出 良好的反应性，但在约 15%~20%的病例中会发生原发性耐药，所以对患者进行血药浓度检测可以有效评估患者的 治疗效果，对于个性化用药，早期发现耐药，以及及时更换治疗方案具有一定的参考价值。 本研究基于PCS-MS-Mate 联用质谱分析系统开发了血液中伊马替尼的快速检测方法，无需繁琐的样品前处理， 1 步操作1min 完成样品分析，本方法的检出限为0.01μg/ mL ，定量限为0.05μg/ mL 。 图1 伊马替尼的结构式 实验部分 1.1 仪器及材料 线性离子阱质谱仪 （Thermo LTQ ）； MS-Mate （M2001 ）； 快速检测试剂包（含PCS 试剂盒、微量液体取样器、快速检测专用溶剂-A0 1）； PCS 干燥器（PCSD1001 ）。 1.2 分析条件 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：子离子扫描； 喷雾电压：4kv ； 毛细管温度：30℃； 监测离子对和碰撞能量见表1. 表 1 监测离子对和碰撞能等参数 化合物中文名称 母离子 子离子 碰撞能 伊马替尼 30 494 394 Imatinib 伊马替尼-d8 30 502 394 Imatinib -d8 1.3 实验方法 1.3.1 实验样品 伊马替尼，CAS 152459-95-5，冷藏保存，使用时稀释至所需浓度； 伊马替尼-d8 ，CAS 1092942-82-9，冷藏保存，使用时稀释至所需浓度 阴性血液样品存于密封容器中，冷藏保存。 1.3.2 样品检测 在距纸基前端约6mm 处轻轻压一约2mm 直径的圆印，加入1μL 伊马替尼-d8 内标中间液，烘干，将加有内标 的纸基安装入试剂盒内，等待加载血样。 用微量液体取样管移取血液，加载于圆印上，将试剂盒放入烘干装置至血液凝固，冷却后取5 滴快速检测专用 溶剂-A0 1 加载于溶剂窗口，而后将PCS 试剂盒插入MS-Mate 进样平台，供质谱测定。 1.3.3 定量测定 以伊马替尼标准液浓度为横坐标，伊马替尼监测子离子m/z394.2 响应值与伊马替尼-d8 监测子离子m/z394.2 响 应值的比例为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对未知样品进行定量，样品溶液中伊马替尼的响应值应 在检测的线性范围内。 实验结果与讨论 2. 1 线性范围 伊马替尼标准溶液配制浓度及离子响应值比见表2 ，标准曲线见图2 。 表2 伊马替尼标准溶液配制浓度及离子响应值比 标液浓度（ng/mL ） 50 100 200 500 1000 离子响应值比 0.16 0.35 0.49 1.76 2.77 3.5 3 y = 0.0028x + 0.0613 例 2.5