表面等离子共振 (SPR) 技术与Biacore原理.pptVIP

Company Logo Company LOGO 表面等离子共振 (SPR) 技术与Biacore原理 戴璐 表面等离子共振 (SPR)原理 表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance, SPR) 消逝波：当光从光密介质射入光疏介质，入射角增大到某一角度，使折射角达到90°时，折射光将完全消失，而只剩下反射光，这种现象叫做全反射。 当以波动光学的角度 来研究全反射时，人们发现当入射光到达界面时并不是直接产生反射光，而是先透过光疏介质约一个波长的深度，再沿界面流动约半个波长再返回光密介质。则透过光疏介质的波被称为消逝波。  表面等离子共振 (SPR)原理 等离子波：把金属表面的价电子看成是均匀正电荷背景下运动的电子气体，其中正、负带电粒子数目几乎相等，这实际上也是一种等离子体。当金属受电磁干扰时，金属内部的电子密度分布会变得不均匀。因为库仑力的存在，会将部分电子吸引到正电荷过剩的区域，被吸引的电子由于获得动量，故不会在引力与斥力的平衡位置停下而向前运动一段距离，之后电子间存在的斥力会迫使已经聚集起来的电子再次离开该区域。由此会形成一种整个电子系统的集体震荡，而库仑力的存在使得这种集体震荡反复进行，进而形成的震荡称等离子震荡，并以波的形式表现，称为等离子波。 表面等离子共振 (SPR)原理 SPR光学原理：光在棱镜与金属膜表面上发生全反射现象时，会形成消逝波进入到光疏介质中，而在介质 中又存在一定的等离子波。当两波相遇时可能会发生共振。当消逝波与表面等离子波发生共振时，检测到的反射光强会大幅度地减弱。能量从光子转移到表面等离子，入射光的大部分能量被表面等离子波吸收，使反射光的能量急剧减少。 可以从反射光强响应曲线看到一个最小的尖峰，此时对应的入射光波长为共振波长，使反射光完全消失的入射角就是SPR角。SPR角随金膜表面折射率变化而变化，而折射率的变化又与金膜表面结合的分子质量成正比。因此可以通过对生物反应过程中SPR角的动态变化获取分子之间相互作用的特异信号。 SPR生物传感器 SPR生物传感器的光源为偏振光(polarized light),传感芯片(sensor chip)表面镀有一层金膜,实验时,先将一种生物分子(ligand)固定在金膜表面,然后将与之相互作用的分子(analyte)溶于溶液(或混合液)流过芯片表面。SPR检测器能跟踪溶液中的分子与芯片表面的分子结合、解离整个过程的变化,不同角度的反射光的光强被记录后得到角度-光强曲线图,每条曲线的波谷即为该曲线的共振角,共振角对应的角度为共振信号(resonance signal),时间与对应共振信号的曲线即为SPR传感图(sensorgram)。 SPR生物传感器 以免疫学分析为例,在金膜表面固定某种受体(如抗体),然后流过含相应配体(如抗原)的样品,配体与受体的结合将使金膜与溶液界面的折射率上升,从而导致共振角发生变化。为了表述的方便,共振角(或共振信号)可以用共振单位(resonance units,RU)来表示。对大多数生物分子而言,1000RU大约等于1mm2的面积上有1ng的质量变化，相当于溶液中蛋白浓度为6mg/ml。SPR生物传感器通过检测获得共振角的改变程度,便可以对配体浓度进行定量。 SPR 生物传感技术的应用领域 生物大分子的相互作用： 肿瘤研究 免疫学和传染病 神经科学 生物制药 蛋白质组学 Biacore可研究的生物分子范围 蛋白质 DNA/RNA 脂类 /脂质体/ 生物膜 多糖 多肽 小分子 全细胞/病毒/微生物 可分析的对象 Biacore核心组件 Biacore提供的生物分子相互作用信息： 有无结合 (Yes or No) 结合的特异性和选择性 (Specificity) 两种分子的结合强度 --亲和力 (Affinity) 结合和解离的快慢和复合体的稳定性 --动力学 (Kinetics) 功能复合体形成的参与者、协同者和组装顺序 (Mechanism) 分子结合的温度与热力学特征 (Thermodynamics) 目标分子活性含量的检测 (Concentration) SPR光学组件 微流控系统(IFC) 集成化、自动化的微流路控制系统 样品消耗量低 为互相作用分析而设计优化 微流控系统 (IFC)–流动池 IFC上有4个流动池 可选择单独、配对、串联使用。 流动池为配对使用进行了优化(Fc1-Fc2, Fc3-Fc4) 传感芯片 传感芯片 葡聚糖表面 亲水性 温和型: 和2%浓度的葡聚糖水溶液环境相似 非特异性结合量低 高结合容量 易于进行共价结合 出色的化学稳定性 传感芯片的选择 11种不同的芯片种类