微生物限度方法学验证.pptVIP

细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证 回收率测定举例 试液需用特殊制备方法（薄膜过滤法） 菌液组：1ml菌液 /平皿，每株菌平行 2个平皿（计算平 均菌数：C) 供试品对照组：含1g或1ml的供试液，过滤冲洗，至少1 张膜（菌落计数：B) 试验组：含1g或1ml的供试液，过滤冲洗，+1ml菌液，过 滤，至少1张膜（菌落计数：A) 稀释剂对照组：稀释剂+菌液，过滤冲洗，至少1张膜 （菌落计数：D) 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证 过滤细菌的膜贴在预先倒好并预培养过的营养琼脂 培养基平板上，菌面朝上。 过滤霉菌酵母菌的膜贴在预先倒好并预培养过的玫 瑰红钠琼脂培养基平平板上，菌面朝上。 试验组回收率=(A－B)÷C×% 稀释基对照组回收率=D÷C×% 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证 计数方法的确定 细菌计数方法与霉菌和酵母菌计数方法可以不一致。 细菌以各试验菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯 草芽孢杆菌）的回收率均能达到70%以上的检测方法为准。 霉菌和酵母菌以各试验菌（白色念珠菌、黑曲霉） 的回收率均能达到70%以上的检测方法为准。 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证 计数方法的验证——结果判断 在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率 应均不低于70%。 若试验组的菌回收率均不低于70%，则按此供试液制 备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数能 保证检验结果的准确、可靠。 若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应采用 培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法 等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并 重新验证。 控制菌检查法的验证 试验菌株：按规定检查的控制菌选择相应验证的菌株。 阴性对照菌株:选择原则，口服选用金黄色葡萄球菌，外 用选用大肠埃希菌 。 菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。 加菌量:10～100cfu 控制菌检查法的验证 验证试验按供试液的制备和控制菌检查法的规定及 下列要求进行。 验证试验可与供试品的控制菌检查同时进行。 试验组：取规定量供试液及10～100cfu试验菌加入 增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查. 阴性菌对照组：设立阴性菌对照组是为了验证该控 制菌检查方法的特异性，方法同试验组。 控制菌检查法的验证 控制菌检查验证用菌株：大肠埃希菌、沙门菌、金 黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌 。 控制菌检查法的验证 ? 口服制剂 验证用菌株：大肠埃希菌 大肠菌群 沙门菌 阴性对照菌菌株：金黄色葡萄球菌 检查方法：大肠埃希菌按大肠埃希菌项下检查 大肠菌群按大肠菌群项下检查 沙门菌按沙门菌项下检查 控制菌检查法的验证 外用制剂 验证用菌株：铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 生孢梭菌 阴性对照菌菌株：大肠埃希菌 检查方法：铜绿假单胞菌按铜绿假单胞菌项下检查 金黄色葡萄球菌按金黄色葡萄球菌项下检查 生孢梭菌按生孢梭菌项下检查 控制菌检查法的验证 验证方法选择：常规法、稀释法、薄膜过滤法、中和法、 离心沉淀法、联合方法。 供试品量：1g或1ml，沙门菌检查为10g。 培养基：营养肉汤培养基、胆盐乳糖增菌液、MUG培养基、 胆盐乳糖发酵管、四硫磺酸盐增菌液、胆盐硫乳琼脂平 板、麦康凯琼脂平板、溴代十六烷三甲胺平板、甘露醇 氯化钠平板、0.1%疱肉培养基、含庆大霉素的哥伦比亚 琼脂平板。 微生物限度检查方法的验证 微生物限度检查方法的验证 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证 ——准确性（回收率） 控制菌检查法的验证——专属性 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证 验证的目的： 确认所采用的方法适合该药品的细菌、霉菌、酵母 菌数的测定。照此检查法和检验条件进行供试品细菌、 霉菌、酵母菌数检查能保证检验结果的准确、可靠。 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证 验证的步骤： 根据样品特性，制定检验方法和检验条件。 保证验证试验所用的仪器、培养基和试剂等均符合试验要求。 按制定的方法进行试验。 根据验证结果，判断是否符合验证的标准。若符合,按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，应重新设立验证方案，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证 验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。验证试验至少应进行3