生物技术制药第七章 酶工程制药.pptVIP

（4）共价结合法制备固定化酶技术 共价结合法是通过酶分子的非活性基团与载体表面的活泼基团之间发生化学反应而形成共价键的连接法。 共价结合法反应条件剧烈，常导致酶活下降或失活，成本因失败几率高或效率的低下而变得不太实用，因此在医药工业中应用较少。 / 二、固定化细胞的制备 1、固定化细胞的定义 将细胞限制或定位于特定空间位置的方法称为细胞固定化技术。被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞，它与固定化酶同被称为固定化生物催化剂。 固定化细胞主要利用细胞内酶及酶系，它的应用比固定化酶更普遍。如今该技术已扩展至动植物细胞，甚至线粒体、叶绿体及微粒体等细胞器的固定化。 / 2、固定化细胞的特点 为什么要固定化？——颗粒小、难于截流或定位，而固定化细胞不仅兼具细胞特性、生物催化功能及固相催化剂特点，还因为其具有以下特点： ①无需进行酶的分离纯化； ②细胞保持酶的原始状态，故酶活回收率高； ③细胞内酶比固定化酶稳定性更高； ④细胞内酶的辅因子可以自动再生；⑤细胞本身含多酶体系，可催化一系列反应； ⑥抗污染能力强。 / 3、固定化细胞的制备技术 固定化酶主要适用于细胞内酶，底物和产物易于透过细胞膜，细胞内不存在产物分解系统及其它副反应，若有副反应应有相应消除措施。 固定化细胞技术主要有载体结合法、包埋法、交联法及无载体法。这些技术与前面提到的相关固定化酶的技术类似。 / 三、固定化方法与载体的选择依据 1、固定化方法的选择 （1）固定化酶应用的安全性：主要是指固定化过程中应用的试剂是否有毒性和残留。 （2）固定化酶在操作中的稳定性：主要从酶活和稳定性方面考虑，选择折中的条件。 （3）固定化的成本：应尽可能降低成本。 2、载体选择 一般是为了工业化生产，因此性能好、价格便宜是一项重要的指标；此外，底物或产物性质都是重要的考虑对象。见书P227中表7-2。 / 四、固定化酶的形状与性质 1、固定化酶的形状 目前已有多种物理形状的固定化酶，如酶膜、酶管、酶纤维、微囊和颗粒状的固定化酶。 固定化酶的物理形状不仅是为了适应不同的应用目的及反应类型而制备相应形状，其最终形状还与基质的性质和制备方法有关。 / （1）颗粒状固定化酶 颗粒状固定化酶包括酶珠、酶块、酶片和酶粉等。 制备简单，颗粒比表面大，转化效率高，适用于各种类型的反应器。 （2）纤维状固定化酶 只适用于填充床反应器，已有多种酶膜被制备出来。 （3）管状固定化酶 已制备出糖化酶、转化酶和脲酶等酶管。 / 2、固定化酶的性质 天然酶经过固定化后即成为固定化酶，其催化反应体系也由均相反应转变为非均相反应。由于固定化方法和所用载体性质不同，制备的固定化酶可能会受到扩散控制、空间障碍、微环境变化和化学修饰等因素的影响，可能会导致酶学性质和谜活力的变化。 / （1）酶活力的变化 一般酶活力是下降的，一般都会考虑相应的固定化过程可能对酶的影响，避免损害酶的活性中心，有时在固定化反应体系中会加入抑制剂、底物或产物以保护酶的活性中心。书中乳糖酶的固定化就采用在其抑制剂葡萄糖-?-内酯存在下进行聚丙烯酰胺凝胶的包埋，如此可获得高活力的固定化乳糖酶。 / 生物技术制药-07 第七章 酶工程制药 / 第七章 酶工程制药 第一节 概述 第二节 酶的来源和生产 第三节 酶和细胞的固定化 第四节 固定化酶和固定化细胞的反应器 第五节 酶工程在医药工业中的应用 第六节 酶工程研究的进展 / 第一节 概述 一、酶的特性 酶、酶促反应的定义 酶除具有一般催化剂的共性外，还有其特有的特点：①催化效率高；②专一性强；③反应条件温和；④酶的催化活性受到调节和控制。 1961年按酶所催化的反应类型将酶分成6大类：①氧化还原酶类； ②转移酶类； ③ 水解酶类；④裂合酶类； ⑤异构酶类；⑥合成酶（或称连接酶）类。 / 二、酶工程简介 酶工程是酶学和工程学相互渗透结合、发展而形成的一门新的技术科学。它是从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异性催化功能，并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术。 20世纪20年代初：酶工程名称出现于自然酶制剂在工业上的大规模应用； 1953年，羧肽酶、淀粉糖化酶、胃蛋白酶和核糖核酸酶等用重氮化聚氨基聚苯乙烯树脂进行固定。 1969年，固定化酶技术拆分DL-氨基酸 1971年，1st国际酶工程会议：酶的生产、分离纯化、酶的固定化、酶及固定化酶的反应器、酶及固定化酶的应用等。 / 二、酶工程简介 从现代观点来看，酶工程主要有以下几个方面的研究内容：①酶的分离、提纯、大批量生产及新酶和酶的应用开发；②酶和细胞的固定化及酶反应器的研究（包括酶传感器、反应检测等）；③酶生产中基因工程技术的应用及遗传修饰酶（突变酶）的研究；④酶的分子改造与化学修饰、以及酶的结构与功能之间关系的研究；⑤有机相中酶反应的研究；