10第十章生物技术.pptVIP

水产动物育种学 主讲教师 严美姣 第十章 生物技术 1、标记基因 GFP LacZ 2、PCR 3、斑点杂交(blot hybridization) Northern转移和杂交 Southern 转移 Westen 转移 二、转基因鱼的构建 1、外源基因的结构 启动子 编码序列 转录终止信号 第三节 基因转移技术 2、转基因鱼的构建 第三节 基因转移技术 从供体细胞中分离目的基因或人工合成这种基因，同时制备载体 组成重组体，即目的基因DNA片段与载体DNA分子的连接 将重组体转移给受体细胞，使之在受体细胞内得到表达 外源基因导入鱼卵的方法 1、显微注射法 是否去膜 注射的时间 注射的位置 影响因素 第三节 基因转移技术 显微注射转基因技术 利用显微操作技术转移外源基因的方法。此法转入基因长度可达数百kb；并能随机地整合在受体细胞染色体DNA上，因此应用范围广。但是这种整合有时会导致转基因动物基因组的重排、易位、缺失或定点突变。 2、电穿孔法（电脉冲法） 原理：利用外部高电压短脉冲使细胞膜的结构改变，使之产生可逆的孔隙或孔洞，一定大小的分子包括DNA即可通过孔隙或孔洞进入细胞。 电穿孔法实现外源基因的转移 第三节 基因转移技术 3. 精子载体法（精子介导基因转移） 外源基因进入精子内 外源基因黏附在精子上 4. 基因枪法（高速钨微粒轰击法或粒子枪法） 第三节 基因转移技术 基因枪 磷酸钙—DNA共沉淀法基因转移技术 这种方法是受二价金属离子能促进细胞吸收外源DNA的启发而发展起来的。当核酸以磷酸钙—DNA共沉淀物的形式在时，细胞摄取DNA的能力显著加强。但转移效率较低，仅有1%~5%的外源DNA可以进入受体细胞核中，大约仅有1%的DNA可以在细胞中稳定表达。 脂质载体包埋法 将需要转移的外源DNA或RNA包裹于脂质体内，由于脂质体具有磷脂双层结构，与细胞膜类似，因此可以与受体细胞膜融合，从而将外源DNA转入宿主细胞。这种方法转基因效率高。 病毒介导的生物学方法 第三节 基因转移技术 3. 转基因鱼的检测 （1）注射外源基因受体鱼的筛选 A 斑点杂交 B PCR法 （2）外源基因整合的检测 A 外源基因整合的判断 B 非整合形式的外源基因的判断 C 其他 （3）外源基因转录的检测 （4）外源基因表达产物的检测 A 表达产物具酶活性 B 表达产物无酶活性 第三节 基因转移技术 第三节 基因转移技术 M 第三节 基因转移技术 第三节 基因转移技术 第三节 基因转移技术 第三节 基因转移技术 第三节 基因转移技术 三、基因工程与鱼类育种 转生长激素基因鱼促生长效应明显，为渔业带来巨大经济效益 鱼类转基因技术主要应用于提高经济效益、提高饵料转化效率、改善抗病和抗恶劣环境能力等 构建“全鱼”基因，研制转基因鱼 转基因鱼技术将给鱼类育种带来新的腾飞。 1、研究现状 第三节 基因转移技术 2、应用 快速育种 改良养殖性状 生产生物医药制品 第三节 基因转移技术 * * 水产动物育种学 第一节 细胞核移植 细胞核移植（nuclear transplantation）：应用显微操作技术，将一种动物细胞的细胞核移入到同种或异种动物的去核成熟卵内的精细技术。又称为核质杂交。 细胞核移植所得的杂种称为核质杂种。 细胞核移植 第一节 细胞核移植 一、核移植研究的概况 1938年德国Hans Spemann首先提出核移植的设想，但因技术问题没实现。 1952年，美国科学家罗伯特·布里格斯（Robert Briggs）和托玛斯·金（T.J. King）首先用两栖类卵细胞最早建立了细胞核移植技术。 他们将豹蛙（Rana pipiens）发育到胚囊的胚胎细胞做核移实验，成功地获得了一个可以摄食的豹蛙幼体。 第一节 细胞核移植 豹蛙移核实验的操作步骤和实验结果图解 第一节 细胞核移植 小小的蝌蚪改写了生物技术发展史，成为世界上第一种被克隆的动物。 题外话：豹蛙20年前还见得着，但是由于人为的环境污染的加剧，它们于1979年灭绝，不能不说是对人类的嘲讽 。提示我们保护环境的重要。 第一节 细胞核移植 从1961年开始，童第周等以金鱼为材料，进行鱼类不同亚科间的细胞核移植获得成功，用以研究杂交细胞