生物化学蛋白质化学02.ppt

蛋白质一级结构的测定 蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的一级结构以来，现在已经有上千种不同蛋白质的一级结构被测定。 1.测定蛋白质的一级结构的要求 1、样品必需纯（>97%以上）； 2、知道蛋白质的分子量； 3、知道蛋白质由几个亚基组成； 4、测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数。 5、测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。 2. 测定步骤 (1) 测定蛋白质分子中多肽链的数目 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。 2. 测定步骤 (2) 二硫键的断裂 几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。 2. 测定步骤 (3)多肽链断裂成多个肽段，可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。 2. 测定步骤 (4)测定每个肽段的氨基酸顺序 2. 一般测定步骤 (5)确定肽段在多肽链中的次序 利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。 2. 一般测定步骤 (6)确定原多肽链中二硫键的位置 螺旋结构的表示-SN S-螺旋每旋转一圈 所含的残基数 N-形成氢键的O与N原子 间在主链上的原子数 310－螺旋 π螺旋（4.416－螺旋） 提问 1、维持蛋白质的相互作用力，那些是主键、次级键？ 2、蛋白质结构层次如何划分？维持各结构的作用力？ 3、二级结构的类型有那些？各类型的特征？ 3、新生肽的折叠 分子伴侣帮助新生肽正确折叠成天然构象。 热休克蛋白（heat shock protein,HSP) 选择题 1. 在下列有关谷胱甘肽的叙述中,正确的是( ) A. 谷胱甘肽中含有胱氨酸 B. 谷胱甘肽是体内重要的氧化剂 C. 谷胱甘肽谷氨酸的α-羧基是游离的 D. 谷胱甘肽的C-端是主要的功能基团 2. 在有关蛋白质三级结构的描述中, 正确的是( ) A. 具有三级结构的多肽链都有生物学活性 B. 三级结构是单体蛋白质或亚基的空间结构 C. 三级结构的稳定性由次级键维持 D. 亲水基团多位于三级结构的表面 3. 在有关蛋白质四级结构的描述中, 正确的是( ) A. 蛋白质四级结构的稳定性由二硫键维系 B. 四级结构是蛋白质保持生物学活性的必要条件 C. 蛋白质都有四级结构 D. 蛋白质亚基间由非共价键聚合 4. 每一种完整蛋白质分子必定具有（ ） A. α–螺旋 B. ?-折叠 C. 三级结构 D. 四级结构 5. 盐析法沉淀蛋白质的原理 A. 中和电荷，破坏水化膜 B. 盐与蛋白质结合成不溶性蛋白盐 C. 调节蛋白质溶液的等电点 D. 降低蛋白质溶液的介电常数 6. 蛋白质结构域（） A 都有特定的功能 B 折叠为较为紧密的区域 C 属于三级结构 D 存在于每一种蛋白质中 7. 空间结构包括（） A α-螺旋 B β-折叠 C 结构域 D 亚基 8. 右手α-螺旋 是一种很稳定的构象，稳定的主要原因（） A 螺旋内有芳香氨基酸残基 B 螺旋内所有肽键的-NH与CO都参与氢键形成 C 侧链基团从螺旋中向外伸出，不彼此作用 D 每一个碳碳连键的旋转度都相同 9. β-转角中肽链主链出现（） A 800 B 1800 C600 D1500 4.蛋白质变性主要是其——结构受到破坏，而其——结构仍为完 好。 5.血红蛋白是含有——辅基的蛋白质，其中的——离子可结合1分子氧。 6.维持蛋白质高级结构的非共价键有——、——、——、——等。 名词解释 等电点 蛋白质一、二、三、四级结构 蛋白质变性 亚基 盐析与盐溶 协同效应 肽平面 60000~80000转/分 重力60万～80万倍 大分子： 蛋白质分子直径1-100nm,大数球状蛋白，分子直径在胶体溶液范围。溶于水，能形成稳定的胶体溶液 亲水： 外裹电荷层、水化层 蛋白质的胶