第3章 吸附层析.ppt

* * * * * * * * * Collector * Pump * * * * * * * * * * * * * * * * * * 海南大学农学院wss* 显色 喷显色剂显色最重要是有好的雾化器。 * 海南大学农学院wss* * 海南大学农学院wss* * 海南大学农学院wss* 6.特殊薄层 针对某些性质特殊的化合物的分离与检出，有时需采用一些特殊薄层。 ① 荧光薄层 ② 络合薄层 ③ 酸碱薄层和pH缓冲薄层 * 海南大学农学院wss* ① 荧光薄层 有些化合物本身无色，在紫外灯下也不显荧光，又无适当的显色剂时，则可在吸附剂中加入荧光物质制成荧光薄层进行层析。 展层后置于紫外光下照射，薄层板本身显荧光，而样品斑点处不显荧光，即可检出样品的层析位置。常用的荧光物质多为无机物。其一是在254 nm紫外光激发下显出荧光的，如锰激活的硅酸锌。另一种为在365 nm紫外光激发下发出荧光的，如银激化的硫化锌等。 * 海南大学农学院wss* ② 络合薄层 常用的有硝酸银薄层。用来分离碳原子数相等而其中C－C双键数目不等的一系列化合物，如不饱和醇、酸等。 其主要机理是由于不饱和C－C键能与硝酸银形成络合物，而饱和的C－C键则不与硝酸银络合。因此在硝酸银薄层上，化合物可由于饱和程度不同而获得分离。层析时饱和化合物由于吸附最弱而R f最高，含一个双键的较含两个双键的Rf值高，含一个三键的较含一个双键的Rf值高。此外，在一个双键化合物中，顺式的与硝酸银络合较反式的易于进行。因此，还可用来分离顺反异构体。 * 海南大学农学院wss* ③ 酸碱薄层和pH缓冲薄层： 为了改变吸附剂原来的酸碱性，可在铺制薄层时采用稀酸或稀碱以代替水调制薄层。 例如硅胶带微酸性，有时对碱性物质如生物碱的分离不好，如不能展层或拖尾，则可在铺薄层时，用稀碱溶液0.1～0.5 N NaOH溶液制成碱性硅胶薄层。 例如猪屎豆碱在以硅胶为吸附剂时，以氯仿－丙酮－甲醇（8 : 2 : 1）为展开剂R f＜0.1，采用碱性硅胶薄层用上述相同展开剂，R f值增至0.4左右。说明猪屎豆碱为一碱性生物碱。 * 海南大学农学院wss* * 海南大学农学院wss* 第二节 薄层层析 一、固定相支持介质的选择 二、操作及注意事项 三、应用实例 * 海南大学农学院wss* 应用 薄层层析法在中草药化学成分的研究中，主要应用于化学成分的预试、化学成分的鉴定及探索柱层分离的条件。 用薄层层析法进行中草药化学成分预试，可依据各类成分性质及熟知的条件，有针对性地进行。由于在薄层上展层后，可将一些杂质分离，选择性高，可使预试结果更为可靠。 以薄层层析法进中草药化学成分鉴定，最好要有标准样品进行共薄层层析。如用数种溶剂展层后，标准品和鉴定品的R f值、斑点形状颜色都完全相同，则可作初步结论是同一化合物。但一般需进行化学反应或红外光谱等一种仪器分析方法加以核对。 * 海南大学农学院wss* 此外，薄层层析法亦应用于中草药品种、药材及其制剂真伪的检查、质量控制和资源调查，对控制化学反应的进程、反应副产品产物的检查、中间体分析、化学药品及制剂杂质的检查、临床和生化检验以及毒物分析等，都是有效的手段。 * 海南大学农学院wss* * 海南大学农学院wss* 内容提要 第一节 吸附柱层析 第二节 薄层层析 第三节 聚酰胺薄膜层析 * 海南大学农学院wss* 第三节 聚酰胺薄膜层析 优点：灵敏度高、分辨力强、展层迅速和操作简便。 此法可分析氨基酸衍生物DNP-氨基酸、PTH-氨基酸、DNS-氨基酸以及DABTH-氨基酸。 在蛋白质化学结构分析中，聚酰胺薄膜层析法和Edman降解法结合作为一种顺序分析的超微量方法已被普遍采用。 用于酚类、醌类、硝基化合物、氨基酸及其衍生物、核酸碱基、核苷、核苷酸、杂环化合物、合成染料、磺胺、抗菌素、环酮、杀虫剂和维生素B等16类化合物的分析。 * 海南大学农学院wss* 基本原理： 由己二酸与己二胺合成的化学聚合体，含有大量的酰胺基团，称为聚酰胺。它对很多物质通过形成氢键的方式结合。以被分离物形成氢键能力的强弱，确定吸附力的差异，通过展层而得以分开。 * 海南大学农学院wss* 应用:蛋白质 N 末端的 DNS 分析技术 DNS-蛋白质DNS-肽 荧光试剂（DNS-Cl） + 蛋白质（肽） 酸解 中和 抽提 DNS-N 末端氨基酸 析层 显色 分析 * 海南大学农学院wss* 标准氨基酸的DNS化及层析程序 * 海南大学农学院wss* 蛋白质的氨基酸组成分析程序 蛋白质在盐酸中水解110℃，18－24小时 中和 DNS-Cl 调pH9-10.5 盐酸调pH 2－3，乙酸乙酯抽提 层析的DNS-氨基酸 *