PCR扩增和电泳检测课件.pptVIP

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2019-09-13 发布于江苏
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PCR扩增和电泳检测课件.ppt

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PCR扩增和电泳检测;;DNA在体内复制的条件是什么？;DNA分子的结构;合成DNA分子的原料——脱氧核苷三磷酸;合成DNA分子的原料——脱氧核苷三磷酸; ;DNA聚合酶;不同细胞的细胞周期;PCR的概念; ;PCR技术原理;PCR三步曲;PCR仪;用于PCR的预混液（ 500?L 体系）： ddH2O 310 ?L 10×butter 50 ?L MgCl2 40 ?L dNTP混合液 20?L 引物1 25?L 引物2 25?L 模板DNA 25?L Taq DNA聚合酶 5?L;反应试剂用量 PCR SuperMix 10μL 引物Ⅰ（浓度10μM） 1μL 引物Ⅱ（浓度10μM） 1μL 模板DNA 5μL ddH2O 3μL 总体积 20μL;微量可调移液器（一档吸、二档排）; PCR反应参数：　　　　 ;1、基本概念以琼脂糖凝胶作为介质,DNA在外加电场的作用下泳动的技术。 2、实验原理琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。;琼脂糖凝胶电泳基本原理;;;将梳子从制胶槽中拔出 ;取出凝胶板放入电泳槽中 ; 琼脂糖凝胶电泳中缓冲液的作用 1、增加电导率； 2、维持电泳过程中的合适的pH。 ;吸取PCR反应产物10μL。注意吸头要插入到管底，才能取到PCR产物。 ;;;进行电泳10-20分钟;实验用的核酸荧光染料与DNA嵌合后，在DNA图谱观察仪的可见光下发射黄绿色荧光。 ;PCR的应用