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《医学生物化学实验》教案 第 1 次课 2学时 实验项目 3，5-二硝基水杨酸法（DNS法）测定还原糖 实验性质 设计性实验 教学目的和要求 1、了解糖的还原性 2、掌握还原糖定量测定的原理和方法。 3、熟悉分光光度计的使用方法。 教学重点与难点 重点:绘制标准曲线的方法，分光光度计的使用原理和使用方法。 难点：标准曲线的应用。 实验材料 1.试剂 （1）1mg/mL葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL，即含葡萄糖为1.0mg/mL。 （2）3，5-二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3，5-二硝基水杨酸并量取262 mL 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 mL水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 mL贮于棕色瓶中。 （3）未知浓度还原糖。 材料 小麦淀粉或玉米淀粉。 器材 分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。 实验内容 一、实验原理★：在NaOH和丙三醇存在下，3，5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 黄色 桔红色 二、实验步骤： 1.取7支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。 表1 葡萄糖标准曲线制作 管 号 1mg/ml葡萄糖标准液(mL) 蒸馏水 (mL) DNS (mL) 葡萄糖含量(mg) 光密度值(OD-540nm) 1 0 0.5 0.5 0 2 0.1 0.4 0.5 0.1 3 0.2 0.3 0.5 0.2 4 0.3 0.2 0.5 0.3 5 0.4 0.1 0.5 0.4 6 0.5 0 0.5 0.5 7（未知浓度还原糖） 0.5 0 0.5 0.5 将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min取出，冷却至室温，用蒸馏水补足至5mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。调波长540nm，用1号管调零点，分别测出2~6号管的光密度值。 2.绘制标曲▲ 以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量(mg)为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线（电脑Excel完成最好）。计算7号管还原糖的百分含量。 三、结果与计算▲： 计算出7号管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。 查曲线所得葡萄糖毫克数×提取液总体积/测定时取用体积 还原糖(%) =——————————————————————————×100% 样品毫克数 教学过程中师生活动设计 糖的还原性，具有还原性的糖结构有何特点？ 提纲、板书设计 实验原理及反应方程式，实验步骤中表1及计算公式 作业 为什么要设置空白对照？ 标准曲线的定义？ 主要 参考资料 [1] 《生物化学实验》，何幼鸾、汤文浩，华师出版社，2013 [2]《生物化学实验》，董晓燕主编，化学工业出版社，2010 总结分析 让学生理解糖定量测定的原理及方法； 强调标准曲线的绘制要点； 需要和学生一起推导还原糖浓度的公式 《医学生物化学实验》教案 第 2次课 2学时 实验项目 糖的呈色反应和还原糖检验 实验性质 验证性实验 教学目的和要求 1.了解糖类某些颜色反应的原理 2.学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法 教学重 点与难点 重点：颜色反应鉴别糖的方法 难点：鉴别糖的反应原理 实验材料 1、仪器：试管及试管架、滴管、移液管及恒温水浴锅 2、试剂：莫氏试剂、塞氏试剂、托伦试剂；1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、1%果糖溶液、1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液 实验内容 一、实验原理★： α—萘酚反应：糖在浓无机盐作用下，脱水生成糠醛衍生物，后者在浓硫酸的作用下能与α—萘酚生成紫红色物质，在糖液面与浓硫酸液面间出现紫色环。但一些非糖物质对此反应也呈阳性 间苯二酚反应：在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基醛，后者可与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮糖的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应慢。 托伦反应：戊糖在浓酸作用下脱水生成糠醛，后者可与间苯三酚结合生成樱桃红色物质。本反应常用来鉴定戊糖，戊糖此反应最快，可以和其他糖类区分。 二、操作步骤▲： α—萘酚反应：先取3支试管，分别加入1%葡