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实验三抗体形成细胞能力的检测QHS和次免疫 Complement-binding site IgM CH3区，IgG CH2区 抗原+抗体 结合补体 抗原+抗体+补体 补体活化，形成MAC 靶细胞裂解 ( QHS——Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination ) 定量溶血分光光度计法体外检测 细胞产生抗体的能力 1. 原理： 抗原 SRBC 免疫小鼠 4 days later 浆细胞 IgM + SRBC 补体 分光光度计定量分析 脾脏 2. 材料： SRBC免疫小鼠 新鲜SRBC溶液 (1.5×108/ml) 经SRBC吸收的补体溶液 来自豚鼠血清 经SRBC吸收去除非特异性抗体 3. 方法： 取脾，以Hank’s 液漂洗 经200钼铜网，以针拴研磨脾脏成单细胞悬液 收集细胞悬液，加适量Hank’s 洗涤 离心1500rpm, 5min 1） 制备脾细胞 弃上清 细胞沉淀中加入4.5ml蒸馏水，用力混匀 40s 迅速加入0.5ml 9%NaCl 离心 1500rpm, 5min 弃上清，加入1.2ml Hank’s溶液 断颈处死SRBC免疫的小鼠 3. 方法： 2）抗原-抗体-补体反应： 脾细胞 Hank’s 1ml 加1ml SRBC 溶液 加1ml补体 彻底混匀 37℃孵育1h 离心，3000rpm，5min 分光光度计检测上清液413nm波长下的吸光值 C T 3. 方法： RBC WBC WBC WBC WBC 1mm 1mm 细胞浓度/ml = 4个大方格中的细胞总数/4 x 104 细胞浓度/ml = 5个中方格中的细胞总数 x 5 x 104 4. 注意事项： 新鲜SRBC溶液，用前晃匀 保持脾细胞活性 Test 2 第三次免疫 2. 方法: 脱纤维绵羊红细胞（SRBC） 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清 制备绵羊红细胞溶液20%、25%、30%、40% 取0.1ml 皮下注射免疫小鼠 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清