实验9玉米幼胚再生系统的建立.docVIP

实验9 玉米幼胚再生体系的建立 摘要 以玉米幼胚作为外植体,研究了不同的培养基对玉米幼胚愈伤组织的诱导的影响及愈伤组织继代和分化的情况，结果表明，7种不同的培养基均能诱导出愈伤组织，诱导率都很高，但是分化培养基则不理想，大部分的都是枯萎没生长情况。本实验利用玉米幼胚的培养，主要目的是学习和掌握幼胚培养的一般方法，从而可以在现实生活中有所应用。 关键词 玉米 幼胚 愈伤组织 激素 前言 玉米作为我国一种重要的禾谷类粮食作物 ,其组织和细胞培养研究受到人们的重视并取得了巨大的进步。在玉米的外植体培养中 ,对幼胚培养的研究很多 ,并已建立了比较完善的组织培养体系. 1 材料与方法 1.1 实验材料 玉米幼胚 玉米愈伤组织 1.2 方法 1.2.1 玉米幼胚愈伤组织诱导培养基 1组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 2组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 3组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 4组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+2,4-D0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 5组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D4.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 6组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D4.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 7组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D2.0mg/L+NAA0.1mg/L 按照培养基的配置方法来配置以上培养基，灭菌后，分装到4个培养皿中待接种。 1.2.2 玉米幼胚接种 剥去玉米包被，用75%酒精清洗，将玉米棒子切成3、4段，置于75%酒精浸5min，倒去酒精，加0.1%升汞浸泡11min，无菌水冲洗3次。用无菌镊子，小刀取出玉米幼胚，选取完好无损的幼胚接种于培养基。每个培养皿接种10粒，于25℃暗培养。 1.2.3 玉米愈伤组织分化诱导培养基 1组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 2组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L +蔗糖30g/L+琼脂7g/L 3组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L +NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 4组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA3.0mg/L +NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 5组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L +NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白0.3 mg/L +蔗糖30g/L+琼脂7g/L 6组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 6-BA3.0mg/L +NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白0.3 mg/L +蔗糖30g/L+琼脂7g/L 7组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 6-BA3.0mg/L +NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白0.3 mg/L +谷氨酰胺mg/L+0.7蔗糖30g/L+琼脂7g/L 按照培养基的配置方法来配置以上培养基，分装到4个小三角瓶中封口再灭菌，待接种。 1.2.4 分化接种 在超净台上夹取松散的，好的玉米愈伤组织放于分化培养基中进行分化培养。于25℃ 2 实验结果 2.1. 计算及结果分析 诱导率（%）=（形成愈伤组织的外植体块数/接种的外植体块数）*100% 污染率（%）=（污染外植体块数/接种的外植体块数）*100% 全班数据统计 愈伤组织诱导 分化培养 组数 诱导率 污染率 出绿率 出苗率 1 86.5% 2.7% 8.1% 5.4% 2 90.9% 3% 0 0 3 88% 0 0 0 4 100% 10% 污染 5 90% 10% 100% 75% 6 97.5% 0 0 0 7 94.4% 0 污染 从整个班试用的不同的培养基中．玉米幼胚的诱导愈伤组织实验结果很好，诱导率很高，污染率相对比较低。分化结果不好，大部分的分化培养中愈伤变枯萎，但5组的实验结果比较理想，1组有实验结果，但出绿率和出苗率都比较低，从中得出其他枯萎了的愈伤可能是在实验过程中镊子冷却不够，导致愈伤死亡枯萎。最终对比不出来最佳的培养基和最佳的激素浓度。 2.2 玉米幼胚愈伤组织诱导 玉米幼胚愈伤组织的诱导很成功，诱导率达到70%，无污染。与之前的植物愈伤组织诱导结果好很多。 2.4 玉米愈伤组织的分化 玉米幼胚愈伤组织的分化失败，愈伤组织不生长，还呈现了黑色枯萎的愈伤