高通量测序技术和实用数据分析.pptxVIP

生物信息学 Bioinformatics;第一节 测序技术及其发展;含有A,T,C三种脱氧核苷酸，G双脱氧核苷酸，依次类推;测序引物与单链DNA模板分子结合后，DNA聚合酶用dNTP延伸引物。延伸反应分四组进行，每一组分别用四种ddNTP（双脱氧核苷酸）中的一种来进行终止，再用PAGE分析四组样品。从得到的PAGE胶上可以读出我们需要的序列。;基于第一代测序技术进行全基因组测序主要依靠“鸟枪法”。 将目的基因组DNA随机打断成小片段，然后分别对这些大小不同的小片段进行测序，再将这些小片段利用重叠关系连接起来，从而形成一致序列，达到全基因组测序的目的。 分级鸟枪法测序和全基因组鸟枪法测序是采用鸟枪法进行基因组测序的2种主要方法。其中分级鸟枪法需要构建物理图谱。全基因组鸟枪法不需要构建物理图谱，直接将全基因组随机打断成小片段进行测序，操作过程相对简单很多，但是在生成一致序列时依赖强大的计算能力。;第二代测序：高通量测序（NGS）; 常见的高通量测序测序平台;焦磷酸测序技术：引物与模板DNA退火后，在dna聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase)、荧光素酶(1uciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)4种酶的协同作用下，将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号的释放偶联起来，通过检测荧光的释放和强度，达到实时测定DNA序列