实验九十十一.docVIP

PAGE PAGE 9 实验九 人类染色体标本制备及核型分析 目的 了解人类外周血淋巴细胞染色体玻片标本制备方法。 观察正常人体细胞染色体的形态、数目，掌握核型分析方法。 试剂与器材 1． RPMI-1640培养基、小牛血清、PHA（5mg/ml）、秋水仙素（10μg/ml）、肝素（600 IU/ml）、固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、低渗液（0.075mol/L氯化钾）、5%NaHCO3溶液、三蒸水、双抗(青、链霉素)、Giemsa染液（1%）、PH6.8磷酸缓冲液。 2． 超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、鼓风干燥机、离心机、冰箱、高压消毒锅、分析天平、注射器、培养瓶、离心管、滴管、滤器、滤膜、酒精灯、载玻片。 3． 显微镜、人类染色体玻片标本、拭镜纸、二甲苯、香柏油、人类染色体放大照片、核型纸、剪刀。 内容 1． 观看电教：人体外周血培养及染色体标本的制备。 2． 人体外周血淋巴细胞的培养及染色体玻片标本制作。 3． 正常人体细胞染色体核型分析。 人类染色标本的制作 (一) 实验原理 人体外周血淋巴细胞是保持了增殖潜能的暂不增殖细胞（G0细胞），一般可在血液中循环几年都不分裂。但在人工离体培养条件下，若在培养基中加入PHA（phytohemagglutinin，植物血细胞凝集素），PHA可刺激G0细胞转化为淋巴母细胞，重新获得增殖能力，并进行有