外源基因的原核表达【PPT】.pptVIP

大肠杆菌表达系统的主要不足 1、缺少真核生物的蛋白质翻译后修饰和加工过程。 2、表达的蛋白质多以包含体形式存在，需经复性才能恢复构象与活性 3、宿主本身杂蛋白质多，纯化步骤复杂。 常见的大肠杆菌表达系统 Lac和Tac表达系统：以lac操纵子调控机制为基础设计和构建的表达系统。通过对大肠杆菌tac I 基因诱变，获得能过量表达lac I 阻遏蛋白的基因突变体lac Iq，使外源基因的表达调控在一定的水平。此外，目前还构建了阻遏蛋白温度敏感型突变体lac Iq(ts)宿主菌和载体，使lac和tac启动子的转录受温度的控制，在低温(30oC)下基因的转录受到抑制，在(42oC)下基因的转录保持开放。 常见的大肠杆菌表达系统 PL和PR启动子表达系统：以λ噬菌体早期转录启动子PL和PR构建的。在野生型λ噬菌体中，PL和PR启动子的转录与否决定λ噬菌体进入裂解循环或溶原循环。 λ噬菌体PE启动子控制的cl基因表达产物是PL和PR启动子转录的阻遏物，而其表达和在细胞中的浓度取决于一系列宿主与噬菌体因子之间的复杂平衡关系。通过细胞因子调节cl在细胞中含量的途径很难操作，因此在构建表达体系时，选用温度敏感突变体cl1857(ts)的基因产物调控PL和PR启动子的转录。 常见的大肠杆菌表达系统 T7表达体系：利用大肠杆菌T7噬菌体转录系统元件构建的，具有很高表达能力的表达系统。T7噬菌体RNA聚合