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RecQ解旋酶分子特性的研究 【摘要】：Waston和Crick提出DNA双螺旋结构后，不仅引导人们发 现了 DNA聚合酶，它作用于DNA以一条链为模板聚合形成一条新的 DNA链;而且也让科学家们寻找到一种酶能够在DNA复制时破坏互 补碱基对的氢键结构而打开DNA双螺旋结构。随后，相似功能的酶在 RNA复制屮也被发现。这类酶被科学家称为解旋酶。解旋酶是一类 能解开核昔酸双链的酶,它广泛存在于从病毒到人类等多种生物体 中。自1976年人类在大肠杆菌(EsherichiaColiE.coli)中发现了第一个 解旋酶，至今已有上百种解旋酶被发现，而且这一酶家族成员还在不断 扩大。解旋酶广泛存在于多种生物体中,有些生物还同时具有多种不 同类型的解旋酶。尽管解旋酶种类繁多，人们在研究过程屮发现，这类 蛋白酶在其氨基酸序列上有一定的同源性和相似性。分析表明，这些 同源序列在进化过程中构成了儿个高度保守的区域，这些区域执行不 同的酶功能。人们根据酶的二维结构和一级序列，把解旋酶分为几大 家族来分类研究。经过多年的研究，人们发现解旋酶具有多种功能，在 细胞内它们参与DNA复制、修复、转录重组以及RNA接拼、核糖 体组装、蛋白质翻译，端粒稳定。最近，还发现个别解旋酶甚至参与机 体天然免疫反应机制。解旋酶已不仅仅只是分开核酸双链结构的一类 酶，它的生物功能远不止此。解旋酶第二大家族中的RecQ解旋酶亚家 族在核酸代谢过程中起了关键的作用,这一家族参与DNA复制、DNA 修复、重组、转录甚至端粒稳定机制。人们发现在人体中存在RECQ1、 个易找衣冉 -a% 厲 www.yiT _ 论文发表专家 BLM、WRN、RECQ4和RECQ5这五种RecQ解旋酶家族成员。其 中,BLM、WRN、RECQ4编码基因缺陷会导致人类相应的疾病发生, 它们分别为Bloom 综合症（BS）、Werner综合症（WS）、 Rothmund-Thomson 综合症（RTS）、RAPADILINO 综合症和 Baller-Gerold综合症。这些疾病虽然在人类中都是极其罕见的隐形遗 传疾病，但是在分子水平都表现为基因组高度不稳定性、染色体异常 （染色体断裂、缺失、重排、姐妹染色体交换等）和对DNA损伤因子 敏感性增加。在临床上表现为过早衰老、II型糖尿病、骨质疏松、动 脉硬化和极度容易发生癌症。大部分病人都是最终发生不同癌症而死 亡。这一临床共同现象引起了人们的关注和研究热潮。对解旋酶的结 构功能、作用机制的研究不仅可以认清核酸代谢过程，还能帮助我们 揭示癌症发病的某些相关机理。同时了解病毒解旋酶的结构与功能, 为抗病毒药物的研制提供了新的靶点和思路。解旋酶具有四大基本生 物化学活性:NTP水解活性、DNA或RNA结合活性、核酸链解链活 性和核酸链退火配对活性。在二价金属离子（比如Mg?（2+））和NTP的 存在下，解旋酶便表现出水解NTP的性质，大部分酶水解ATP和dATP, 一些酶则能水解其他的核昔酸，比如TIP和GTPo当解旋酶与DNA或 RNA结合后，利用水解核昔酸产生的能量,推动酶在核酸链上的移动, 从而解开互补的两条核酸链。随着研究的深入,人们发现有些解旋酶 在核酸修复过程中能促使核酸链配对重组。这使得我们意识到解旋酶 在基因稳定过程中的作用越來越重要。但是并不是所有的解旋酶成员 都表现出这四种基本生化功能，这与酶自身的结构有密切的关系，酶的 结构决定了它所能表现的作用机制和生化活性。长期以來，科学家们 一直研究探索解旋酶的结构与其功能间的相互关系，力求发现解旋酶 木质的运作机制。RecQ解旋酶家族尽管蛋口种类繁多,在氨基酸序列 上同源性不高，但有限的同源序列构成了数个典型的功能区域:从N端 向C端方向，分别为位于氨基酸序列中间段的解旋酶核心区域,RecQC 端区域(RecQ-Ct)和解旋酶RNaseD保守区域(HRDC),这些区域具有不 同的功能,并相互协调共同执行解旋酶的运作机制。解旋酶核心区域 是解旋酶标志性结构，它由一段高度保守的氨基酸序列组成，含有7个 保守区域，负责结合NTP、NTP水解和DNA结合。RecQ-Ct区域是 RecQ解旋酶家族唯一含有的结构特征，但不是所有RecQ成员都含有 这一结构域o RecQ-Ct区域包含两个重要的亚结构域:由四个a螺旋和 四个保守的半胱氨酸残基组成的结构平台，因能特异结合锌离子而被 命名为锌结合区域或锌指结构⑵nc-bindingmotif,zinefinger,ZBM);序 列上不太保守的翼型螺旋亚结构域(winged-helix9WH)。目前发现 RecQ-Ct结构域主要负责酶与核酸的结合、酶自身的折叠作用。HRDC 区域位于解旋酶氨基酸序列的C端,在部分RecQ成员中缺失,对这一 结构域的认识甚浅,一