血清学鉴定实验课件.pptVIP

血清学鉴定实验 血清学诊断：是指用已知细菌的特异性抗原检测患者血清中相应抗体的方法，以诊断感染性疾病。（用已知抗原检测血清中的特异性抗体） 血清学鉴定：即采用含有已知特异性抗体的免疫血清（诊断血清）与分离培养出的未知纯种细菌或标本中的抗原进行血清学反应，以确定病原菌的种或型。 （用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原） 微生物抗原成分-----细菌抗原成分 菌体抗原:革兰氏阴性菌的菌体抗原称O抗原---脂多糖蛋白质的复合物 鞭毛抗原称为H抗原 表面抗原:不同细菌的表抗原名称不同.大肠杆菌的表面抗原称为封套抗原或K抗原,肺炎双球菌的叫荚膜抗原,伤寒沙门氏菌的表面抗原称为Vi抗原 细菌抗原 细菌的各种抗原 抗原抗体反应 抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内（invivo），也可发生于体外(invitro)。体内反应可介导吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用；体外反应则根据抗原的物理性状、抗体的类型及参与反应的介质（例如电解质、补体、固相载体等）不同，可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应及中和反应等各种不同的反应类型。因抗体主要存在于血清中，在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验，所以体外抗原抗体反应亦称为血清反应（erologicreaction）。 抗原抗体反应条件 抗原 抗体 3. 环境因素： （1）电介质：0.85%NaCI； （2）温度：37或56 （3）pH值：7.0 （4）振荡：适当的机械振 （5）反应时间 抗原抗体反应的特点 特异性和交叉性 若两种抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交叉反应。亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高 。 反应的可逆性 抗原与抗体的结合为分子表面的结合，结合的适宜温度为0～40℃、pH在4.0～9.0范围内。如温度超过60℃或pH降到3.0以下，或加入解离剂台硫氰化钾、尿素等，则抗原抗体复合物又可重新解离，解离后的抗原或抗体性质不改变。 抗原抗体反应特点 最适比和带现象 只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的结合反应。 当抗原过多或抗体过多，则抗原抗体的结合不能形成大的复合物，因而抑制可见反应的出现，这一现象称为带现象。 抗体过多出现的抑制现象称前带现象，而抗原过多出现的抑制现象称后带现象。 为了克服带现象，在进行血清学试验时，需将抗原或抗体作适当稀释。 抗原抗体反应特点 反应的二阶段性 结合阶段-----反应发生快，几秒钟至几分钟 。 反应阶段-----较慢，需几分钟、几十分钟或更长时间 。 凝集反应 颗粒性抗原（如细菌、红血球等）或吸附在乳胶、白陶土、离子交换树脂和红细胞的抗原与其特异性抗体结合后，在有电介质存在时，凝聚成肉眼可见的凝集小块。 凝集原——凝集素 直接凝集反应 玻片法 试管法 抗原抗体反应类型-----凝集反应 血清学鉴定 掌握细菌的血清学鉴定法 。 实验目的 实验原理 根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点，用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。 实验材料 1.菌种 待检细菌 2.试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3.其他 载玻片 沙门氏菌诊断血清（11种） O2 O4 O7 O9 Ha Hb Hc Hd Hi Vi A-F群多价O A-F群多价O O抗原、H抗原和Vi抗原 O抗原:是一种沙门氏菌细胞壁表面的耐热多糖抗原 ，100 ℃，2.5 h不被破坏，它的特异性依赖于细胞壁脂多糖侧链多糖的组成。 H抗原:是一种蛋白质性鞭毛抗原，共有63种，60 ℃加热30～60 min及酒精作用均可破坏其抗原性，但能抵抗甲醛。 Vi抗原: 是一种N-乙酰-D-半乳糖胺糖醛酸聚合物，60 ℃加热1 h即破坏其凝集性和免疫原性。 沙门氏菌的主要抗原组成 O抗原：至少58种, 含相同抗原组分归为一组，引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组。 H抗原：分为Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示，Ⅱ相以1、2、3等表示。 Vi抗原：抗原性弱，不稳定，可阻止O抗原与其相应抗体的凝集反应。 沙门氏菌菌型的表示方法 血清型以数字和字母表示. 例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表. 鼠伤寒沙门氏菌: O抗（1，4，[5]，12）， 第Ⅰ相H抗原（i） 第Ⅱ相H抗原(1,2)。 它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（ 1，4，[5]，12：i：1，2） [ ]内的O抗原可能存在或不存在。 [ ]内的H抗原可