疟疾实验技术.pptVIP

PBS缓冲液的配制（0.01 mol/l PBS pH7.2） KH2PO4 0.38g Na2HPO4 1.02g (或Na2HPO4 ·12H2O 2.58g) NaCl 8.00g 蒸馏水加至 1000ml （三）染色方法 可用吉氏或瑞氏染色法染色。 国家推荐使用吉氏染色法。 根据临床工作的实际情况，为了方便操作，推荐使用瑞氏-吉姆萨染液（临床用于血常规推片染色）。 吉氏染色（主要成分：水） 吉氏染液要现用现配，配制好的染液保存 不超过24小时。染液工作浓度为 2％（ 2ml吉氏原液+98ml蒸馏水缓冲液混匀）。 先用甲醇固定薄血膜。 厚血膜如果放置时间超过48小时，需要用 蒸馏水或清水溶血。 取吉氏染液工作液滴在厚、薄血膜上，20~30min后，水洗、晾干。 瑞氏染色（主要成分：甲醇） 厚血膜需要用蒸馏水或清水溶血。（用蜡笔在厚、薄血膜间划一界限） 在薄血膜上滴加6~7滴瑞氏染液，轻轻摇动玻片，使染液在血膜上展开30秒钟，加蒸馏水或缓冲液10~12滴，摇动玻片，使染液与水充分混合，并将染液引到厚血膜上，使厚薄血膜同时染色5分钟，然后用蒸馏水或缓冲液将血膜冲洗干净，晾干后检查。 推荐染色方法 由于瑞氏-吉姆萨染液中含有甲醇，因此在操作时，与瑞氏染液染色方法相同。 应该在厚血膜完全干燥后，用蒸馏水或清水溶血，然后再进行染色。 染色方法可参照产品说明书。 四、影响血膜染色质量的因素 血片染色好坏，除与玻片的清洁程度、血膜制作的质量和染色技术等有关外，还与下列因素有关： 染剂和溶剂的质量（分析纯、容器无水、试染） 染液的新旧 （染色前1~2周配制，越久越好） 染液的稀释浓度 浓 ——着色快，各种细胞着色深，薛氏点、 茂氏点等粗大显著 。 稀 ——染液浓度低，着色慢，但各种细胞内部结构着色均匀、清晰，但薛氏点、茂氏点不够清楚。 稀释和冲洗用水（pH7.0~7.2 ） 太蓝——水pH值偏碱，用pH较低的缓冲水冲洗； 太红——水pH值偏酸，用pH较高的缓冲液冲洗； 太深——建议延长冲洗时间。 偏 酸 偏 碱 标 准 染色时间及温度 染色时间长，效果好 ；温度高，着色快 。 冲洗方法 染色后不要直接将染液倒掉，应沿玻片及染色缸边缘加水使染液表层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。 血涂片检查 在染色后的血膜上加一滴香柏油，用光学显微镜油镜检查。以检查厚血膜为主，薄血膜主要用于虫种鉴别。 间日疟镜下可见：环状体、滋养体、裂殖 体、配子体 恶性疟镜下可见：环状体、配子体 厚、薄血膜镜检示意图 123 XX 着色较好的血膜，红细胞呈淡红色，嗜酸性粒细胞颗粒呈鲜红色，嗜中性粒细胞核呈紫蓝色，淋巴细胞及疟原虫胞浆呈蓝色或淡蓝色，疟原虫核呈红色。除环状体外，其他各期均可查见疟色素。以查完整个厚血膜，未查见疟原虫者判为阴性。根据疟原虫形态确定恶性疟、间日疟、三日疟、卵形疟或混合感染。 嗜酸性粒细胞 中性粒细胞 淋巴细胞 中性粒细胞 单核细胞 红细胞 血细胞形态 血小板 人体四种疟原虫红内期各期形态鉴别 环状体 大滋养体 裂殖前期 成熟裂殖体 雌配子体 雄配子体 间日疟、恶性疟薄血膜中形态特点 间日疟原虫 恶性疟原虫 被寄生红细胞 胀大；颜色褪色；出现薛氏点，红色，细小数多。 大小正常，颜色正常或稍紫；茂氏点红色，粗大数少。 小滋养体 (环状体) 较大，约占红细胞直径的1/3；核1个；胞浆较薄；无色素。 小环状体较小，约占红细胞直径1/6, 大环状体与间日疟原虫相似；核1或2个；胞浆小环状体纤细，大环状体与间日疟原虫相似；无色素。 大滋养体 较大；核多见1个；胞浆阿米巴样，含空泡；色素黄褐色，细小，杆状，散在分布多见。 较小；核1或2个；胞浆圆形，空泡不显著；色素黄褐色，细小，结成团块后，呈黑褐色。 未成熟裂殖体 较大；核；胞浆圆形或不规则，空泡消失；色素黄褐色，分布不匀。 较小；核2个以上胞浆圆形，空泡消失；色素黑褐色团块状。 成熟裂殖体 大于正常红细胞；裂殖子较大，2～24个；排列不规则；色素黄褐色，常聚集一侧。 小于正常红细胞；裂殖子较小，8～26个，排列不规则；色素为黑褐色团块。 雌配子体 大于正常红细胞，圆形；核1个，较小，深红色，位于一侧；胞浆深蓝色；色素黄褐色，均匀散在。 较大，新月形，两端尖锐；核1个，较小