药敏试验方法简介课件.ppt

药敏试验方法简介;耐药菌问题日益严重;抗微生物治疗面临的困境;一、 抗菌药物敏感试验（AST）;（1）抗菌药物的选择 在我国主要遵循临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌药物选择原则 A组：对特定菌群常规测试并报告的药物 B组：可常规测试、选择性报告的药物 C组：替代性或补充性药物 U组：仅用于泌尿道感染的抗菌药物;葡萄球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组;肠杆菌科抗菌药物敏感试验推荐分组;假单胞菌属的抗菌药物药物敏感推荐分组;不动杆菌属的抗菌药物药敏试验推荐分组;肠球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组 ;肺炎链球菌抗菌药物药敏试验推荐分组;药敏试验的折点亦遵照每年最新公布的CLSI标准进行，分为敏感（S）、耐药（R）和中介（I）。;敏感：分离菌株能被测试药物使用推荐剂量时在感染部位通常可达到的抗菌药物浓度所抑制 耐药：分离菌株不能被测试药物常规剂量可达到的药物浓度所抑制；分离菌株可能存在某些特定的耐药机制；治疗研究显示药物对分离菌株的临床疗效不可靠;二、抗菌药物的种类及作用机制;三、药敏试验方法学;2.自动仪器药敏系统;纸片扩散法（K-B法） 原理：抑菌圈的大小反映受试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。 ;耐药 中介 敏感;准备抗菌药物纸片和水解酪蛋白（M-H）培养基； 挑取孵育16 ～ 24小时已分纯菌落，置于生理盐水管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准；;用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液，然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周； 平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或商品化的纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面；;35℃孵育16～24小时，量取抑菌圈直径； 根据抑菌环的直径，按照CLSI标准判读，报告敏感、中介、耐药。;*;扩散法药敏影响因素;稀释法 以一定浓度的抗菌药物与含有受试菌的培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），培养16～24h后，通过观察细菌生长现象来测得药物对受试菌的最低抑菌浓度（MIC）。 ;稀释法（MIC法）;肉汤稀释法;常量稀释法;微量肉汤稀释法;接种后应充分混匀，但不能有气泡产生 静置培养 培养温度；35℃ 气体环境：所有细菌（包括苛养菌）均置大气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌置微需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2 培养时间：18小时 ;药敏结果报告可用MIC（μg/ml）或对照CLSI标准用S、R和I报告。 对于稀释法的批量试验，有时需要报告MIC50、MIC90。;稀释法药敏影响因素;E-test法 将稀释法和扩散法的原理结合起来，直接测定药物对受试菌的MIC 。;MIC 值标注于试条的光面;Etest 操作程序;;;;;PhoenixTM100鉴定板革兰氏阳性板、革兰氏阴性板生化反应组合;;;; 加一滴AST指示剂到AST肉汤中 ; 从ID肉汤管中准确吸取25 ?L菌悬液， 加入到AST肉汤中; 将肉汤倒入检测板，盖盖子。检测板 已准备好，可以上机检测。; 扫描板条，输入资料; 将检测板放入仪器（随意位置） ;;强大软件支持： BDXpert微生物专家系统帮助解释和监测检测结果 检测结果分别可分别传入LIS系统或BD Epicenter数据管理系统或打印机，并能进行各种统计学分析;;检测反应孔内微生物生长情况 浊度（传统方法）： 微生物生长形成小颗粒和聚集成团块 氧化还原作用（BD专利技术） ： 通过药敏实验指示剂颜色变化检测微生物的新陈代谢 浊度与氧化还原的变化通过红、蓝、绿光每20分钟检测一次 ;;;;;;举例：SIR解释;举例：天然耐药;结果显示 鉴定结果 (用户可修改) MIC值 来自标准的解释 BDXpert 专家系统SIR结果 最终结果 (用户可修改);;TCP/IP 以太网;;大家辛苦了！ 谢谢各位！