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毕赤酵母表达（pichia pastoris expression ）实验手册 2010-07-15 10:54:56|??分类： \o 毕赤酵母 毕赤酵母 |??标签： |字号大中小?订阅 一．毕赤酵母表达常用溶液及缓冲液的配制?二．毕赤酵母表达的培养基配制?三．主要试验环节的操作?3.1?酵母菌株的分离纯化?3.2?pPICZαA原核宿主菌TOP10F’的活化培养?3.3毕赤酵母表达的试验方法?3.4?毕赤酵母电转化方法?3.5?Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法??3.6?毕赤酵母基因组提取方法?3.7?Mut+表型重组酵母的诱导表达实验关键词： 酵母 实验? 毕赤酵母表达? pichia? pastoris? expression? 毕赤酵母? 酵母菌株 大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单、产量高、周期短、生产成本低。然而，许多蛋白质在翻译后，需经过翻译后的修饰加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及 蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式。大肠杆菌缺少上述加工机制，不适合用于表达结构复杂的蛋白质。另外，蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构，在大肠杆菌中表达的蛋白质往往不能进行正确的折叠，是以包含体状态存在。包含体的形成虽然简化了产物的纯化，但不利于产物的活性，为了得到有活性的蛋白，就需要进行变性溶解及复性等操作，这一过