酶的作用机制和酶活性的调节.ppt

Hill作图 协同性的优点 1. 正协同性的优势 仔细观察图中的双曲线（h=1），很容易发现无协同性的米氏酶将其反应速度从Vmax的 10% 增加到 90%时，需要较大的底物浓度增加。根据图中的数据，速度为10%Vmax时的[S]为Km的1/9，而速度为90%Vmax时[S]为Km的9倍，这相当于底物的浓度需要增加81倍。与此相比，正协同性最高的别构酶（h=4）当反应速度从Vmax的 10% 增加到 90%时，只需要将底物浓度提高3倍，h=2的正协同性别构酶要达到同样的速度增长，需要提高底物浓度9倍。 以上的结果说明，正协同效应意味着酶对环境中底物浓度的变化更为敏感。这样的结果可以使得机体内某些重要的调节酶能够根据环境的变化对代谢进行更加灵敏的调节。 2. 负协同性的优势 呈现负协同效应的别构酶（h=0.5）要将其反应速度从Vmax的 10% 增加到 90%，需要将底物浓度提高6561倍。如此大幅度的提高就意味着该酶对底物浓度的变化极度不敏感。 Hill常数不同的酶的酶活性对底物浓度变化的敏感性 酶的共价修饰调节 是指酶活性因其分子内的某些氨基酸残基发生共价修饰而发生变化的过程。这种调节方式比别构调节要慢。共价修饰的方式有：磷酸化、腺苷酸化、尿苷酸化、ADP-核糖基化和甲基化，其中磷酸化是最为常见的形式。 酶共价修饰的几种形式 蛋白质的“可逆磷酸化” 水解激活 大多数蛋白酶以无活性的酶原形式被合成，需要通过水解（由其它蛋白酶催化或自我催化）去除一些氨基酸序列以后才会有活性，这种调节酶活性的方式被称为水解激活。 与共价修饰一样，水解激活是也一种全或无的调节方式，酶原状态没有活性，但与共价修饰不同的是，它是不可逆的，即一旦被激活就不可能回到原来的非活性的酶原状态。 胰蛋白酶的水解激活 几种蛋白酶的水解激活 糜蛋白酶的水解激活 某些凝血因子的水解激活 调节蛋白的激活或抑制 某些蛋白质能够作为配体与特定的酶结合而调节被结合酶的活性，这些调节酶活性的蛋白质称为调节蛋白，其中，激活酶活性的调节蛋白称为激活蛋白，抑制酶活性的蛋白称为抑制蛋白。抑制蛋白通常结合在酶的活性中心阻止底物与活性中心结合而达到抑制的效果。 蛋白酶 抑制剂 丝氨酸蛋白酶 Serpins 糜蛋白酶 α1-抗糜蛋白酶 补体因子1 C1抑制剂 弹性蛋白酶（嗜中性细胞分泌） α1-抗胰蛋白酶 凝血因子X 抗凝血酶III 凝血酶 抗凝血酶III 纤溶酶 α2-抗纤溶酶 胰蛋白酶 胰胰蛋白酶抑制剂 蛋白酶与蛋白酶抑制剂 抑制蛋白对酶活性的抑制 吸烟对α1-抗胰蛋白酶的损伤 丝氨酸蛋白酶的催化三元体 底物与活性中心的Ser195和Gly193残基通过氢键形成ES复合物，疏水口袋正好容纳芳香环； 亲核的Ser195残基进攻羰基碳，形成第一个四面体形的过渡态中间物； 活性中心的三个氨基酸残基依次参与此阶段的反应，构成催化三元体结构：His57从Ser195移去一个质子，致使Ser195的亲核性大增，而His57成为带正电荷的共轭酸。Asp102通过氢键结合，稳定上述过渡态，而肽键骨架上的酰胺键也通过与His57形成氢键而得以稳定。 四面体中间物因肽氧负离子与Ser195以及Gly193之间形成的氢键而得到稳定，这些相互作用的净效应导致活化能的降低。 肽键断裂，离开基团（原来肽键的氨基一侧作为第一产物）从His57咪唑环上得到一个质子。原来肽键的羧基一侧通过氢键以及与Ser195形成的共价键仍然与酶结合。 水进入活性中心，质子化His57使之成为酸。而释放出来的OH-亲核进攻留下来的多肽羰基碳，于是第二个四面体形的过渡态中间物形成了。 Ser195从His57重新得到质子，His57仍然与它通过氢键相连，过渡态中间物瓦解，脂酰化酶中间物被水解，残留的多肽部分（第二产物）被释放。 糜蛋白酶催化的四 面体中间物的形成 糜蛋白酶催化形成的 四面体中间物的稳定 酶活性的调节机制 酶需要在正确的时间和正确的地点有活性 不合适的表达或激活导致细胞的癌变或死亡！ 如何控制特定的生化反应? 控制已有的酶的活性 控制酶浓度 控制酶的位置 控制底物的可得性 产物的移除或转化 量变 质变 调节速度 慢，几小时～几天 快速，几秒钟～几分钟 能耗 高（通常涉及酶基因表达，因此需要消耗大量ATP） 低（除非使用抑制蛋白，因为在解除抑制的时候，通常需要将抑制蛋白水解） 决定酶最高活性的主要因素 酶合成与水解的相对速度 已有的酶浓度 活性变化 持续时间 长 短 酶的“量变”和“质变”的比较 酶的“量变” 改变酶量的方式有两种，一种是通过同工酶，另外一种是通过控制酶基因的表达和酶分子的降解。 同工酶(isozyme) 同工酶是指催化相同的反应但性质不同（Vmax和/或Km不同）的酶。