Ch05 基因在大肠杆菌、酵母中的高效表达(part two).pptVIP

Ch05 基因在大肠杆菌、酵母中的高效表达(part two);5.2.1.2 酵母菌表达外源基因的优势;5.2.2 酵母菌的宿主系统;5.2.2.1 广泛用于外源基因表达的酵母宿主菌;4.2.2.2 提高重组蛋白表达产率的突变宿主菌;4.2.2.3 抑制超糖基化作用的突变宿主菌;4.2.2.4 减少泛素依赖型蛋白降解作用的突变宿主菌;酵母菌泛素依赖型蛋白降解系统的编码基因;泛素降解途径衰减的酿酒酵母;4.2.3 酵母菌的载体系统;4.2.3.1 酵母菌中的野生型质粒;乳酸克鲁维酵母中的线状质粒;4.2.3.2 酵母菌克隆表达质粒的构建;4.2.4 酵母菌的转化系统;(1) 酵母菌原生质体转化法 早期酵母菌的转化都采用在等渗缓冲液中稳定的原生质体转化法 原生质体转化法的一个显著特点是：一个受体细胞可同时接纳多个质粒分子;(2) 碱金属离子介导的酵母菌完整细胞的转化;(3) 酵母菌电击转化法;4.2.4.2 转化质粒在酵母细胞中的特点;4.2.4.3 用于转化子筛选的标记基因; 显性标记基因的编码产物主要是毒性物质的抗性蛋白;4.2.5 酵母菌的表达系统;4.2.5.1 酵母菌启动子的可控性;酿酒酵母的半乳糖利用酶系 由GAL1 GAL7和 GAL10 基因编码;4.2.5.2 外源基因在酵母菌中表达的限制因素;4.2.5.3 酵母菌表达系统的选择; 乳酸克鲁维酵母的双链环状质粒pKD1已被广泛用作重组异源蛋白生产的高效表达稳定性载体，即便在无选择压力的条件下，也 能稳定遗传40代以上。 乳酸克鲁维酵母表达分泌型和非分泌型的重组蛋白，性能均优于酿酒酵母表达系统。; 巴斯德毕赤酵母是一种甲基营养菌，甲醇可高效诱导甲醇代谢途径中各酶编码基因的表达。 生长迅速、乙醇氧化酶基因AOX1所属强启动子、表达的可诱导性是巴斯德毕赤酵母表达系统的三大优势。 无合适的自主复制型载体，外源基因的高效表达在很大程度上取决于整合拷贝数的多寡。（20余种重组蛋白）; 多型汉逊酵母也是一种甲基营养菌。其自主复制序列HARS已被克隆，并用于构建克隆表达载体，但与巴斯德毕赤酵母相似，这种载 体在受体细胞有丝分裂时显示出不稳定性。所不同的是，HARS质粒 能高频自发地整合在受体的染色体DNA上，甚至可以连续整合100多 个拷贝，因此重组多型汉???酵母的构建也是采取整合的策略。 目前，包括乙型肝炎表面抗原在内的数种外源蛋白在该系统中获得成功表达。;产乙肝表面抗原的重组酿酒酵母;病毒颗粒的主要结构蛋白是病毒的表面抗原多肽（HBsAg）或S多肽 颗粒内的蛋白成份包括核心抗原（ HBcAg ）、病毒DNA聚合酶、微量病毒蛋白;乙型肝炎病毒的包装蛋白编码基因; 乙肝病毒在体外细胞培养基中并不能繁殖，因此第一代的乙肝疫苗是从病毒携带者的肝细胞质膜上提取出来的。 虽然这种质膜来源的疫苗具有较高的免疫原性，但由于原材料的限制难以大规模产业化。;目前，由酿酒酵母生产的重组HBsAg颗粒已作为乙肝疫苗商品化，重组产物的最终产量可达细胞总蛋白量的1%-2%。 ;4.2.6.3 产乙肝表面抗原的重组巴斯德毕赤酵母;4.2.6.3 产乙肝表面抗原的重组巴斯德毕赤酵母;;THANK YOU !;