第5章蛋白质的分离纯化.pptVIP

第5章蛋白质的分离纯化;本章主要内容;蛋白质的两性离解和电泳现象 蛋白质的胶体性质 蛋白质的沉淀作用 蛋白质的变性 蛋白质的紫外吸收 ;一、蛋白质的性质;电泳;由于蛋白质的分子量很大，它在水中能够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎运动等。 由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。 ;蛋白质胶体溶液的稳定性与它的分子量大小、所带的电荷和水化作用有关。 改变溶液的条件，将影响蛋白质的溶??性质 在适当的条件下，蛋白质能够从溶液中沉淀出来。 ;在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。 在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。 可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。;在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。 如加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀和生物碱沉淀等都属于不可逆沉淀。;蛋白质的性质与它们的结构密切相关。某些物理或化学因素，能够破坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性(denaturation)。 ;蛋白质的变性;大部分蛋白质均含有带芳香环的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。 这三种氨基酸的在280nm 附近有最大吸收。因此，大多数蛋白质在280nm 附近显示强的吸收。 利用这个性质，可以对蛋白质进行定性鉴定。 ;二、蛋白质分离和纯化;1．蛋白质的分离步骤;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;2．蛋白质的纯化方法;3.蛋白质含量的测定;?考马斯亮蓝法（Bradford法）考马斯亮蓝G250是一种带有负电荷的染料，在酸性条件下，可与蛋白质上的正电荷结合，形成蓝色化合物，在595nm具有特定吸收，反应简便、快速、灵敏度高，5-50 ?g/ml.;4.蛋白质纯度等的测定