分子生物学-转录复习课程.ppt

第 十 六 章;掌握：DNA复制和转录的区别 掌握：转录模板的特点和所需的酶 理解：原核和真核生物转录的过程及二者间的差异 熟悉：真核生物mRNA的加工过程（掌握断裂基因、内含子、外显子的概念） 了解：tRNA和rRNA的加工 ;转录 (transcription) 生物体以DNA为模板合成RNA的过程(原料、原则、酶、方向） 。 ; 复制和转录的相同点;复制和转录的区别 ;参与转录的物质;模板和酶 Templates and Enzymes;;不对称转录(asymmetric transcription) ;DNA分子上能转录出RNA的区段，称为结构基因(structural gene)。 DNA双链中按碱基配对规律能指引转录生成RNA的一股单链，称为模板链(template strand)，也称作无意义链或Watson链。相对的另一股单链是编码链(coding strand)，也称为有意义链或Crick链。 ;5′···GCAGTACATGTC ···3′;Roger Kornberg Won Nobel Prize for chemistry 2006.;（一）RNA聚合酶催化RNA链合成的机制;DNA聚合酶在启动DNA链延长时需要引物存在，而RNA聚合酶不需要引物就能直接启动RNA链的延长。;（二）原核生物的RNA聚合酶（1种）;核心酶 (core enzyme);利福平和β亚基结合抑制RNA聚合酶;种类;Amanita phalloides （death cap）;真核生物RNA聚合酶的结构比原核生物复杂，所有真核生物的RNA聚合酶都有两个不同的大亚基和十几个小亚基. RNA聚合酶Ⅱ由12个亚基组成，其最大的亚基称为RBP1。 RNA聚合酶Ⅱ最大亚基的羧基末端有一段共有序列(consensus sequence)为Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser的重复序列片段，称为羧基末端结构域(carboxyl-terminal domain, CTD)。 CTD对于维持细胞的活性是必需的。;原核生物的转录过程 The Process of Transcription in Prokaryote;（一）转录起始;2. DNA双链局部解开，形成开放转录复合体(open transcription complex) ；;1、模板上酶的辨认、结合;原核生物以RNA聚合酶全酶结合到DNA的启动子上而起动转录，其中由σ亚基辨认启动子，其他亚基相互配合。 对启动子的研究，常采用一种巧妙的方法即RNA聚合酶保护法。;RNA聚合酶保护法（Footprinting）;开始转录;RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合:;E.coli开放转录复合体的形成 ;2. DNA双链局部解开，形成开放转录复合体(open transcription complex) ；;? cycle;（二）转录延长;Unwinding generates supercoils in the DNA that can be relieved by DNA topoisomerases. Actinomycin D was the first antibiotic to find therapeutic application in tumor chemotherapy. It binds to the DNA template and interferes with the movement of RNA polymerase along the DNA.;转录空泡(transcription bubble)：;;原核生物的边转录边翻译电镜照片; 识别转录起始部位。 与模板链结合，并使DNA双链打开。 催化NTP的聚合。 缺乏外切酶活性,无校对功能。 不同的?识别不同的转录起始位点。;依赖Rho (ρ)因子的转录终止 非依赖Rho因子的转录终止;1. 非依赖 Rho因子的转录终止; 反向重复序列与发夹 Inverted repeats and hairpins;茎环/发夹结构;茎环结构使转录终止的机理;A T P;Rho factor: ATPase activity helicase activity 易与polyC结合;真核生物的转录过程 The Process of Transcription in Eukaryote;（一）转录起始前的上游区段;顺式作用元件包括启动子、启动子上游元件(upstream promoter elemen