CRISPRCas9介导hFAD3基因在奶牛CSN2位值点定点整合研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 CRISPR／ CRISPR／Cas9介导hFAD3基因在奶牛CSN2位点定点整合研究 摘要 脂肪酸去饱和酶一3(fatty acid desaturase 3，FAD3)基因编码n．3多不 饱和脂肪酸脱氢酶，能够将n-6多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty aci ds，PUFAs)转化成n．3 PUFAs。本试验成功构建基因打靶载体pCSN2．hF AD3和具有切割活性的pCas．Guide一1载体。利用CRISPR／Cas9技术将hFA D3基因定点整合到CSN2位点，研究hFAD3基因在乳腺细胞中特异表达， 及其对脂肪酸相关基因表达的影响。结果表明， (1)外源基因己定点整合 到了CSN2靶位点。 (2)实时定量PCR检测hFAD3基因在转染后乳腺细 胞和成纤维细胞中的表达结果显示，乳腺细胞中hFAD3基因的表达量为成 纤维细胞中的2．5倍(PO．01)，说明hFAD3基因的表达具有一定的乳腺特 异性。 (3)脂肪酸含量分析结果显示，转染后细胞n一6／n．3比值较对照细胞 显著下降(P0．01)。 (4)脂肪酸相关基因的表达检测结果显示，两种细 胞中脂肪分解相关基因(LPL、LIPE和PPARg)表达量大于脂肪合成相关 基因(FASN、ACC和SCD)。 (5)通过流式分选法及无限稀释法筛选单 克隆细胞，经PCR鉴定