ENO1在神经胶质瘤铅细胞系中的功能及机制-化学生物学专业毕业论文.docxVIP

目录2．2．1 目录 2．2．1 0抗生素平板筛选阳性克隆 ．20 2．2．11菌液PCR验证阳性克隆 ．20 2．2．12菌种保存 21 2．2．1 3质粒小提 ．21 2．2．1 4双酶切 ．22 2．2．1 5胶回收双酶切后目的片段 ．22 2．2．1 6靶基因与表达载体连接 ．22 2．2．1 7再次转化与扩增 ．23 2．2．1 8重组蛋白诱导表达 23 2．2．1 9重组蛋白SDS．PAGE凝胶电泳及考马斯亮蓝染色 24 2．2．20 GST标签WBP2融合蛋白纯化(实验室已构建好质粒) ．．24 2．2．21 his标签EN01融合蛋白纯化 ．24 2．2．22重组蛋白纯化检测 ．25 2．2．23细胞培养 ．25 2．2．24细胞总蛋白提取 ．25 2．2．25 GST．pull down实验 26 2．2．26银染 ．26 2．2．27质粒中提 ．27 2．2．28 DNA转染U251细胞 28 2．2．29 siRNA稀释 ．28 2．2．30 siRNA转染U251细胞 ．．28 2．2．31 G418筛选稳定转染细胞系 29 2．2．32细胞冻存 29 2．2．33细胞复苏 30 2．2．34 Western．．blot．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．